古尼虫草子实体的人工诱发及菌丝富集钙镁锌的研究

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1、摘要古尼虫草Cordycepsgunnii(Berk.)Berk.是一种寄生在蝙蝠蛾科幼虫中的重要虫生真菌，其无性型为古尼拟青霉Paecilomycesgunnii。本文初次深入研究人工培养古尼虫草子实体的影响因素，并分析研究了古尼虫草子实体的几种重要活性成分以及古尼拟青霉对矿质元素的富集作用，具体有：筛选子实体栽培菌株、筛选液体摇瓶种子培养基、确定培养摇瓶种子液的最适宜时间、优化子实体的最佳生长条件，用正交试验对单因素试验进行验证；采用多种接种手段对非寄主昆虫进行侵染；分析比较古尼虫草三种人工培养物的多糖、氨基酸和矿质元素含量；对古尼拟青霉富集钙、镁、锌的能力进行探究。根据上述

2、试验确立了人工培养古尼虫草子实体的最佳生产工艺：选用古尼拟青霉小孢变种RCEF0864的单孢株Pg05S21作为子实体栽培菌株，以液体摇瓶种子培养基Ⅴ培养摇瓶种子液，且最佳培养时间是8d，以小米作固体基质，子实体栽培营养液作营养液，pH调至6.0，每瓶20g小米和40mL子实体栽培营养液配成子实体栽培培养基，每瓶固体培养基接9mL种子液，接种后置于25℃人工模拟环境培养室中，持续1~200lux光强的散射光培养，直到子实体不生长且健壮时采收。古尼拟青霉对非寄主昆虫侵染无一例成功，综合分析，极有可能是其寄主专一性的原因。对古尼虫草3种人工培养物的成分进行比较，发现平板菌丝体、摇瓶菌

3、丝体和子实体的多糖、氨基酸和矿质元素（钙、镁、锌）的含量明显不同。多糖的比较结果为：平板菌丝体(274mg/g)>子实体(124mg/g)>摇瓶菌丝体(69mg/g)。摇瓶菌丝体中的总氨基酸含量最高，为84.40g/100g，必需氨基酸含量也最高，为31.29g/100g，平板菌丝体的含量分别为81.31g/100g和30.67g/100g，子实体的含量分别为64.33g/100g和25.79g/100g。利用电感耦合等离子发射光谱仪测定Ca含量，比较结果为：平板菌丝体(1870µg/g)>子实体(1260µg/g)>摇瓶菌丝体(893µg/g)。利用原子吸收光谱仪测定Mg和Zn

4、的含量，Mg含量比较结果为：平板菌丝体(1410µg/g)>摇瓶菌丝体(1140µg/g)>子实体(1080µg/g)；Zn含量比较结果为：子实体(152µg/g)>平板菌丝体(139µg/g)>摇瓶菌丝体(105µg/g)。古尼拟青霉对钙、镁、锌的富集试验结果表明：古尼拟青霉对钙、镁、锌的富集在各自浓度为10~160mg/L内效果均较好，且对菌丝体生长的影响较小。在培养基钙浓度为160mg/L时，菌丝体含钙量达到最大值16120µg/g，富钙率在浓度为10mg/L时达到最大值391.3%；在培养基镁浓度为120mg/L时，菌丝体中的镁含量I达到最大值4066µg/g，在浓度为4

5、0mg/L时，富镁率达到最大值38.23%；在培养基锌浓度为160mg/L时，菌丝体中锌含量达到最大值5085µg/g，在浓度为10mg/L时，富锌率达到最大值103.78%。通过比较可知，对于同浓度的钙、镁、锌，古尼拟青霉的富集能力依次为Ca>Zn>Mg。关键词：古尼虫草，子实体，成分分析，矿质元素富集IIAbstractCordycepsgunnii,theteleomorphofPaecilomycesgunnii,whosehostinsectsarethelarvaeofHepialidae,isamajorentomogenousfungus.Inthisresear

6、ch,onthebasisofintensivestudyoftheartificialcultureconditionsonfruitingbodyofC.gunnii,thecontentsofseveralmainactiveingredientsoffruitingbodyandtheabilitiesofenrichingmineralelementsofP.gunniiareanalyzed.Thisresearchincludesstrainsscreening,liquidculturemediumscreening,ascertainmentofoptimalc

7、ulturetimeofflaskseed,cultureconditionsoptimizationonfruitingbodygrowthofC.gunniibysinglefactorexperimentandorthogonalexperiment,infectingnon-hostinsectsbyP.gunniiusingseveralinoculationmethods,analysisofamylase,aminoacidsandmineralelementsof