台湾虫草子实体的人工诱导培养-研究

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1、1文献综述虫草类真菌是一类多寄生于昆虫体上的真菌与其寄主昆虫形成的虫菌复合体，是一类具有复型生活史的真菌，在它们的生活史中有以分生孢子形成为基本特征的无性[1-3]生长繁殖阶段和以子座形成并产生子囊孢子为特征的有性繁殖阶段。鉴于新的虫草分类系统尚不完善，本文仍采用旧的分类系统，虫草隶属于真菌界Fungi、双核亚界Dikarya、子囊菌门Ascomycota、盘菌亚门Pezizomycotina、粪壳菌纲Sordariomycetes、肉座菌亚纲Hypocreomycetidae、肉座菌目Hypocreales、虫草菌科Cordycipit

2、aceae、虫[4]草菌属Cordyceps。据小林义雄和清水大典的统计，全球已报道的虫草种类约400多[5]种，而国际真菌名录数据库2011年列出的种名已达到534种，目前在中国报道的已[6-18]知虫草有139种，分布于29个省区，加上近几年来发表的新种，约有150多种。1.1虫草属真菌开发应用概况虫草属真菌是一类重要的自然资源，它们在医药、保健品开发、食品和饲料添加剂、调节生态系统平衡和生物防治等方面扮演着重要角色。现代药理研究表明，虫草含有虫草酸、虫草素、多糖及水溶性核苷类成分，主要集中在子座部分，具有扩张气管、镇静、降血压、抗缺

3、氧、抗肿瘤等功能，其代谢产物中可产生许多重要的活性成[19-24]分，具有重要的经济价值。1.1.1虫草在医药、食品、保健品方面的应用虫草属的种类多为重要的食用、药用真菌。在我国，虫草最早基本都是直接作为药用，最著名的为冬虫夏草，此外还有蝉花、蛹虫草、大团囊虫草、高雄山虫草等。冬虫夏草[Cordycepssinensis(Berk.)Sacc.]是世界上众多虫草中最著名的一种，主要分布在我国青藏高原海拔500~5000m的高山灌丛草甸和高寒草甸带地区，生长极其缓慢，与鹿茸、人参齐名，作为一种传统名贵中药在我国由来已久。研究表明，冬虫夏草生

4、药、液体发酵液和菌丝体中都含有丰富的活性物质，包括虫草多糖、麦角醇、核苷酸、[25-32]氨基酸、维生素等，具有广泛的药理和免疫活性，因此冬虫夏草在国内外广受人们欢迎。由于虫草在代谢过程中产生许多生物活性物质，可用于药物和食品的研发利用，[33]是一个巨大的药源宝库，更引起人们较大的兴趣。目前，国内许多企业和科研机构已开发出多种药品和胶囊，如心肝宝胶囊、百令胶囊、思壮虫草胶囊等。韩国将高雄山虫草的无性型—细脚拟青霉作为功能食品开发，大量投放市场。日本推出用日本蚁草培养生产的提高免疫力的功能食品。1.1.2虫草在调节生态平衡和生物防治方面的

5、应用虫草是森林生态系统中一些有机物的分解者，在物质循环中起着重要的作用，它们对生态系统和人类生产生活具有重要的意义。虫草可以调节森林中的节肢动物的数1[34-36]量，对维持森林生态平衡起着明显的作用。此外，虫草可为微生物杀虫剂广泛用于生物防治。在上世纪50年代，科学家就用棒形虫草Cordycepsclavulata的无性型蜡蚧被毛孢Hirsutellalecaniicola人工培养防治核桃介壳虫获得成功。现在处于应用阶段的主要有白僵菌用于防治玉米螟、马铃薯象甲和松毛虫等；绿僵菌属中的金龟子绿僵菌和黄绿绿僵菌分别用于防治白蚁和蝗虫等[37

6、,38]害虫；拟青霉属中的玫烟色拟青霉防治粉虱、蚜虫、叶螨等。1.2虫草属真菌无性型的研究概况虫草是一类重要的药用真菌，它们能以两种完全独立的的生活方式存在，在其生活史中有以无性孢子（分生孢子）形成为基本特征的无性生长繁殖阶段和以子座形成并产生有性孢子（子囊孢子）为特征的有性繁殖阶段。前者称为无性型（anamorph），[39,40]后者则称为有性型（teleomorph），它们可各自独立循环生长和产孢。但无论是在科学研究还是培养、生产虫草用于医药、食品、保健品、真菌杀虫剂及其它生产实践应用领域，都主要依赖于虫草的无性型做菌种。因此获得纯

7、培养的无性型菌种以及揭示与虫草有性型之间的相互对应关系，不仅可以丰富、完善或修正虫草研究的内容，[41,42]同时也为物种资源的有效保护和合理利用开发奠定基础。因此，加强无性型的学术研究，不仅有利于保护野生资源，而且更适合于工业化生产，具有十分重要的学术研究意义和实际应用价值。1.2.1虫草采集和无性型分离在野外采集的虫草标本要尽量新鲜，无杂菌生长，它对于分离获得确切无性型至关重要，在低温下保湿迅速运至实验室。对于没有完全成熟的标本可在实验室内模拟原始生境进一步培养至成熟，再行分离。一般来说，虫草无性型的分离常采用以下两种方法：[43]（

8、1）子囊孢子分离法：几乎所有的虫草都能采用这种方法分离获得其无性型，梁宗琦在分离古尼虫草时用到该方法，将采得新鲜完好的虫草先用自来水仔细洗去表面的土粒，勿使虫草破损,再用蒸馏水冲洗几次，最后用