双重荧光定量rt-pcr检测猪o型口蹄疫病毒gx和xj株方法的建立及应用

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1、分类号Ｓ８５２．６５学校代码１０１２９ＵＤＣ６３６学号２０１３２１６０巧Ａ寒古落寺乂攀硕±学位论文．■＞双重巧光定量ＲＴ－ＰＣＲ检测猪０型口蹄疫病毒ＧＸ和ＸＪ株方法的建立及应用－Ｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔａｎｄ－ｐＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａＤｕｐｌｅｘＲｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲＡｓｓａｙｆｏｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＧＸａｎｄＸＪＳｔｒａｉｎｏｆＰｏｒｃｉｎｅＴｙｐｅＯＦＭＤＶ１Ｔ．气、Ｖ．．一＇、

2、‘．、．ｒ．申请人：张帆１＾若心学位类别；兽医硕±＇：—ｔ领域：指导教师：周伟光副教授论文提交日期二〇－五年六月：巧蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加Ｌ乂标注和致谢的地方外，论义中不包括其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材一料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明

3、确的说明并表示谢意。之处一，本人承捏切相关责任申请学位论文与资料若有不实。Ｉ，日期－诚论文作者签名：旅邮：少内蒙古巧业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解巧蒙古农业大学有关保护知巧产权的规琴，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属巧蒙古农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文王作成果时署名单位为内蒙古农业１大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署《为巧蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文档，允

4、许论文被查閑和借阅。学校可レ乂公布学位论文的全部或部分内容（保密、内容除外），采用影印缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：旅似今指导教师签名：＇日期Ｘ、：１Ｍ中Ｉ摘要为了建立检测０型口蹄疫病毒不同基因型的双重巧光定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，本试－７株和Ｏ－验根据口蹄疫病毒Ｏ／ＧＸ／０９／ＸＪ／１０Ｕ株ＶＰ１基因序列设计合成１对通用引物和２个Ｔａｑｍａｎ探针。通过制备ＧＸ与ＸＪ株标准品ＲＮＡ，优化反应条件，建立双重茨光定量ＲＴ－ＰＣＲ价其灵敏性，特异性、重复性。利用

5、建立的双重焚，并评光定量ＲＴ—ＰＣＲ检测方法对猪０型ＦＭＤ疫苗中的ＧＸ和ＸＪ株进行鉴别检测，Ｗ及对疫苗中病毒ＲＮＡ含量进行定量测定。－结果显示，检测ＧＸ与ＸＪ株双重定量ＲＴＰＣＲ标准曲线的相关系数分别为２２－民＝＝立的双重巧光定量ＲＴ０．９９７和Ｒ０．９９５；建ＰＣＲ方法能够同时鉴别检测灭活病毒中口蹄疫病毒不同基因型，具有良好的特异性与灵敏性；ＲＮＡ含量最低检测限为１０拷贝／＾Ｌ。应用此方法能够满足对企业生产车间的不同批次口蹄疫灭活病毒和种毒的ＲＮＡ含量进行有效的检测，，还可

6、用于种毒的纯化检验并且为疫苗的生产质一种新的检测方法量控制提供了。双重巧光定量ＲＴ－关键词：口ＰＣＲ蹄疫病毒；疫苗；ｃａｔｉｏｎｏｆ－ＤｅｖｅｍｅｎｔａｎｄＡｌｉａＤｕｌｅｘ民ｅａｌｔｉｍｅＲＴ夺Ｃ民ｌｏｐｐｐｐＡｓｓａｙｆｏｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＧＸａｎｄＸＪＳｔｒａｉｎｏｆＰｏｒｃｉｎｅＴｅＯｙｐＦＭＤＶＡｂｓｔｒａｃｔＴｏｄｅｖｒｅａｌ－ｔｉｍｅ艮Ｔ－ｆｏｒｄｄｉｆｆｅｌｏｐｉ打ａｄｕｌｅｘＰＣＲｍｅｔｈｏｄ巧ａｃｔｉ

7、ｎｇｅｒｅｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｓｇｐｆｒｏｍ－ａｎｄ－ｄｖｉｒｕＦＭＤＶｒｏｆｕｎｉｖｒｓａｒｉｍｒｓａｔｙｐｅＯｆｂｏｔｍｏｕｔｈｉｓｅａｓｅｓｅｓ（），ｏｎｅｐａｉｅｌｐｅｎｄｔｗｏＴａｑｍａｎｐｒｏｂｅｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇ化ｔｈｅＶＰ１ｇｅｎｅ化ｑｕｅｎｃｅｓ－－ｏｆＦＭＤＶＯ／ＧＸ／０９７ａｎｄ０／ＸＪ／ｌ０１１ｓｔｒａｉｎ．ＴｈｒｏｕｇｈｒｅａｒｉｎｏｆＧＸａ

8、ｎｄＸＪｓｔｒａｉｎｐｐｇｓａｎｄａｒｄｈｔ－－ｔＲＮＡｔｅｎｏｔｉｍｉｚｉｎｒｅａｃｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｔｈｅｄｕｌｅｘｒｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣ艮ｗｉｌｌｂｅ，ｐｇ，ｐｄｅｖｅｌｏｅｄｉ打ｔｈｉｓｓｈａｄ．ＡｎｄｉｔｓｓｅｎｓｉｔｉｖＵｙｓｅｃｉｆｉｃｉｔａ打ｄｒｅｅａｔａｂｉｌｉｔｉｌｌｂｅｅｖａｈｘａｔｅｄ．ｐｙ，ｐｙｐｙｗＴｈｅｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｐｏｒｃｉｎｅ