内源香蕉条斑病毒（ebsv）的基因型分析及激活

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1、分类号：S432.1密级：UDC：632学号：2111202220硕士学位论文内源香蕉条斑病毒（eBSV)的基因型分析及激活刘春柳指导教师：胡汉桥教授串请学位类别：农学硕士专业名称：植物病理学研究方向：分子植物病理学与植物病理生理学学院名称：农学院中国•湛江2015年6月内源香蕉条斑病毒(eBSV)的基因型分析及激活摘要香蕉是一种重要的水果。大多数香蕉来源于尖叶蕉（M.acuminate,AA）和长梗蕉（M.balbisiana,BB）。栽培的香蕉可分为香芽蕉(AAA)、大蕉(ABB)和粉蕉(ABB)3种主要类型。近年来，香蕉

2、条斑病毒病给香蕉的生产和种质交换造成了严重的威胁，其病原物为香蕉条斑病毒（Bananastreakvirus,BSV）。在我国已从广东香芽蕉中分离出一种BSV，按病毒的分类为BSOLV的一个变种，称为BSOLV-GD（BananastreakOLvirusGuangdong）。香蕉基因组中发现了与附加体BSV病毒高度同源的序列，将此序列称为香蕉的内源BSV（endogenousBSV,eBSV），而将独立于染色体外的BSV称为附加体病毒（episomalBSV）。已描述的eBSV具有相似的结构，它们将病毒基因组片段化、重复和倒

3、置。eBSV具有不同的基因型，可分为感染型和非感染型，感染型的可以激活产生附加体病毒从而引起香蕉发生条斑病。为明确香蕉中不同基因型eBSV的激活及其机制，根据长梗蕉中一个与BSOLV-GD相应的eBSV（eBSOLV-GD）的结构设计引物，分析香蕉中eBSV的基因型、eBSV的表达和激活。获得的结果如下：1.用多重结合PCR对23种香蕉材料的附加体病毒进行了检测，发现除云南滑粉和杂粉-1号这两个材料感染了附加体病毒。而其它材料都没有感染附加体BSOLV-GD。这些没有感染BSOLV-GD的材料将用于香蕉eBSV激活的研究。2.

4、将BSOLV-GD序列用BLAST进行同源性搜索后发现来源于长梗蕉的一个细菌人工染色体（bacterialartificialchromosome,BAC）克隆（AP009334）中包含9个与BSOLV-GD同源的片段，并作出了eBSOLV-GD的结构图。分析BAC克隆中eBSV序列与BSOLV-GD序列的碱基替换，在BAC克隆的eBSOLV-GD区域中发现50个核苷酸突变。其中分为21个同义突变（SynonymousMutation）和24个错义突变（MissenseMutation）。3.为明确香蕉中eBSV的不同的基因型

5、，根据eBSOLV-GD的结构设计引物，采用内源条斑病毒基因型分析的方法对所试材料进行分析。结果表明：只含A基因组的香蕉中不含eBSOLV-GD；含B基因组的香蕉中eBSOLV-GD的基因型可分为7种，部分为感染型的eBSOLV-GD。4.用RT-PCR的检测方法对eBSOLV-GD的表达进行了研究。结果表明粉蕉和大蕉中eBSOLV-GD的片段Ⅱ和Ⅲ能表达，并且粉蕉中eBSV片段表达最强，I它的表达量大约是大蕉和香芽蕉的3倍。5.选择5种不含附加体病毒且具有不同eBSOLV-GD基因型的香蕉，经组织培养后，调查香蕉后代条斑病的

6、发病率。No.1广粉-1号和高芭粉蕉的发病率分别达18.0%和16.8%，明显比香牙蕉和大蕉高，但香牙蕉和大蕉的发病率没有显著差异。发病率与eBSOLV-GD的基因型无关，而与香蕉的类型有关。用M-DB-PCR检测发病植株，结果只从粉蕉和大蕉发病植株中检测到BSOLV-GD，香芽蕉中没有检测到BSOLV-GD。引起粉蕉和大蕉发病的原因是由eBSOLV-GD激活产生了附加体病毒。关键词：条斑病毒，内源条斑病毒，基因型，激活，组织培养IIGenotypeanalysisandactivationofendogenousBanana

7、streakvirus(eBSV)AbstractBananaisanimportantfruits.MostbananasoriginatedfromM.acuminata(AA)andM.balbisiana(BB).ThemaintypesofbananainChinaareCavendish(AAA),Plantain(ABB)andPisangAwaksubgroup(ABB).Bananastreakvirus(BSV)isaseriousthreattobananaproductionandgermplasmex

8、changeinrecentyears.ABananastreakvirus(DQ451009)hasbeenisolatedfromadiseasedbananaaccessionBaxijiaoinGuangdong,TheBSVwasavariantofBSOLVand