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《猪圆环病毒2型不同地区毒株的分离鉴定及基因型分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、猪圆环病毒2型不同地区毒株的分离鉴定及基因型分析动物医学进展.201l,32(10):75～78ProgressinVeterinaryMedicine猪圆环病毒2型不同地区毒株的分离鉴定及基因型分析王贵华,陈义锋,刘明明,陈翠云,赵亚荣(北京大北农动物医学研究中心,北京100097)摘要:分别对收集于山东,山西,北京和河北的PCV一2核酸阳性的病料进行PCV-2分离鉴定,采用PCR和间接免疫荧光法对各分离毒株进行鉴定,并对各分离毒株的全基因组进行克隆,测序和基因型分析.结果共分离到5株PCV-2毒株,分别命名为DBN—sD02,DBN—Sx07DBN—BJ08,DBN—H
2、B12和DBN—HBl3株,GenBank登录号分别为FJ660967,FJ660968,FJ660969,FJ660970和FJ660971.各分离株基因组全长均为1767bp,基因型分析表明,除DBNBJ-08属于PCV-2a外,其余均属于PCV-2b.关键词:猪圆环病毒2型;分离;基因型;鉴定中图分类号:$852.659.2文献标识码:A文章编号:1007—5038(2011)10—0075—04由猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype2,PCV-2)引起的断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post-weaningmultisystemiewastings
3、yndrome,PMWS)自2O世纪90年代初被鉴定以来,该病已给世界养猪业造成了严重危害.研究表明,PCV一2感染除了造成PMWS,同时还与猪呼吸道综合症(Porcinere—spiratorydiseasecomplex,PRDC),猪皮炎和肾病综合征(porcinedermatitisandnephropathysyn—drome,PNDS),先天性震颤,繁殖障碍,胎儿心肌炎和扩张性坏死性肺炎等猪圆环病毒病(Porcinecir-covirusassociated—disease,PCVAD)密切相关[1],已成为影响世界养猪业的最重要的病毒性传染病.流行病学调查[2
4、.3]表明,当前我国猪场的PCV-2感染已相当普遍,由PCV-2感染引起的PCVAD已经给我国养猪业造成了巨大的经济损失,而且PCV-2基因组在不断地发生变异,PCV一2b基因型已取代PCV-2a成为当前的优垫基因型毒株[4],新毒株或新基因型仍在不断出现[5].为了解当前国内感染猪群中PCV一2的基因变异情况,并为PCV-2的分子流行病学,感染及预防控制提供参考,本研究对来自山东,山西,北京和河北的PCV一2PCR检测核酸阳性的病料进行PCV-2分离鉴定.1材料与方法1.1材料1.1.1组织病料采自山东,山西,北京和河北的具有PMWS症状和剖检病变的自然病例的淋巴结(气管
5、支气管淋巴结,肠系膜淋巴结,腹股沟淋巴结),肺脏,脾脏和扁桃体等组织,置于一8O℃冰箱中保存备用.1.1.2细胞和血清PK一15A细胞由北京大北农动物医学研究中心实验室保存;感受态JM109细胞为北京索来宝公司产品;胎牛血清为Gibco公司产品;PCV-2阳性血清由周继勇教授惠赠.1.1.3试剂EX-TaqDNA聚合酶(含1O×buff—er,dNTPs)为宝生物工程(大连)有限公司产品;DNAMarkerDL2000为北京博迈德公司产品;PCV一1和PCV-2PCR检测试剂盒为中国动物卫生与流行病学中心产品;FITC标记羊抗猪IgG为Lifeholder公司产品;MEM,
6、EDTA,胰酶(1/250)为Gibco公司产品;D-Glueosmine-HC1,为Sigma公司产品,pMD-18TSimple载体和DNALigase为宝生物工程(大连)有限公司产品;细菌质粒DNA抽提试剂盒,DNA凝胶回收试剂盒和血液,组织细胞DNA抽提试剂盒均为北京天根生化科技有限公司产品.1.2方法1.2.1PCR检测按照猪圆环病毒聚合酶链反应试剂盒说明书进行检测,即同时用三条引物P1(5一CCGCGGGCTGGCTGAACTT一3),P2(5'-CTCG—GCTATGCGCTCCAAAATG一3)和P3(5'-AC—CCCCGCCACCGCTACC_3)分别对
7、病料中PCV一1(PI和P2扩增产物为652bp)和PCV-2(P1和P3扩增产物为1154bp)进行检测.反应条件为:94℃收稿日期:201i-04—07作者简介:王贵华(1979一),男,山东日照人,博士,主要从事动物疫苗与诊断制品研究.*通讯作者76动物医学进展2011年第32卷第l0期(总第220期)预变性5min;94℃30S,62℃45S,72℃45S,35个循环;最后72℃延伸10min.1.2.2病毒分离取PCR检测PCV一2阳性的病料,经处理后按50mL/L的比例接种6O9/6～7O融合的PCV阴
