河南部分地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及lh2株对昆明小鼠致病性研究

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1、河南农业大学硕士学位论文河南部分地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及LH2株对昆明小鼠致病性研究姓名：王亚丹申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：崔保安；陈红英201206河南农业火学2012届硕士学位论文摘要猪圆环病毒2型(porcinecircovirustype2，PCV2)J,J无囊膜的单股环状DNA病毒，属圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)的成员。PCV2是最小的病毒之一。根据PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列，PCV可分为PCVl311PCV2两个型，PCVl对猪无致病性，但J、-泛存在于猪体内，基冈组全K为1759bp：PCV

2、2有致病性，基因组全长为1767bp或1768bp。PCV2被认为是仔猪断奶斤多系统衰竭综合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)、猪皮炎与肾炎综合征(PDNS)、猪呼吸道综合征(PRDC)、繁殖障碍的主要影响因素。2000年从患PMWS的猪中分离到第一株PCV2分离株，之后，PCV2丰H关疾病在中国迅速蔓延，给我国的养猪业造成了巨人的损失，威胁着养猪业的发展。因此，加强该病及其病原的研究具有重要的意义。利川PCR方法，对河南郑州、南刚、焦作等地采集的疑{以PCV21Lg染的病料进行检测。PCR检测为刚性的病料经处理后，接

3、种无PCV}"j染的PK—15细胞，盲传6代，刖PCR方法仍然能够在接种细胞中检测到PcV2核酸，PRV、PRRSV、PPV、PCVl的PCR检测均为阴性。通过直接免疫荧光试验，观察到了感染病毒的细胞出现了特异性荧光。设计一对引物，扩增山11株分离株的全基冈组，分别命名为：LHl、ZZI、ZZ2、ZZ3、ZZ4、JZl、JZ2、LYl、PDSl、JYl、NYl。与GenBank上已收录的国内外的PCV2序列进行同源性比较利进化树分析。结果表明，11株PCV2中有10株全基冈组为1767bp，基冈组分开!为PCV2b，I株为1768bp，说明PCV2b是河南省PMWS发生的主要因

4、素；11个毒株的同源性位丁i94．9％～100％之间，和其它毒株的同源性为94．7％～】00％；10株基冈组为1767bD的毒株处丁．一人分支上，遗传进化比较稳定。30只6周龄的昆明小鼠被随机分为3N。A组腹腔注射0．2mL／只的PCV2．LH，F10病毒液。B绸腹腔注射O．2mL／只的PCV2．LH。F10病毒液，第一次接种斤7d再次腹腔注射0．2mL／只的PCV2．LH．F10病毒液加强接种一次。C组腹腔注射0．2mL／只的PBS液作为对照组。每组分别在接种J亓7、14、28、35,i142d处夕匕。剖检每只小鼠。收集血．清检il)!!』PCV2特异性抗体。收集组织进77-

5、7H．织病理学研究并IIPCR。PCR结果显示接种病毒的小鼠体内有病毒的复制，组织病理学观察发现接种病毒的小鼠皇『I织有细微的病理损伤，此外，接种小鼠中能产生特异性的PCV2抗体，且明显高丁-对_}!《{组。本研究成功分离出了11株PCV2毒株，并分析了它们与国内夕[-PCV2毒株的同源性，为PCV2在河南地区的分子流行病学、遗传变异及防治奠定了基础。关键词：猪圆环病毒2型；分离；序列分析；致病性河南农业大学2012届硕：}：学位论文Isolation，IdentificationofPorcineCircovirusType2(PCV2)inHenanandLH2Strain

6、PathogenesisinKunmingMiceSupervisor：Prof．CutBaoanMastercandidate：WangYadanABSTRACTPorcineCircovirus(PCV)isasmallnonenvelopedviruswithasingle-strandedcircularDNAgenome，whichbelongstotheCircoviridaefamily，itisoneofthesmallestanimalviruses．Accordingtothepathogenicity，antigenicityandnucleotidese

7、quenceofpcv,PCVcanbedividedintotwotypes，PCV1andPCV2．PCV1isconsideredtobenon—pathogenictopigsbyexperimentalinoculationandwascirculatingwidelyinswinepopulationintheworld．Itscompletegenomewascomposedof1759nucleotides．However,PCV2genomeconsistsof1767or