江苏部分地区2012--2013年猪圆环病毒2型的分离鉴定及其致病性研究

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1、江苏部分地区2012．2013年猪圆环病毒2型的分离鉴定及其致病性研究Isolationandidentificationofporcinecircovirustype2inpartialJiangsuareaofChinaandstudiesonitspathogenicity研究生：高杏专业：预防兽医学导师：高崧教授扬州大学兽医学院2014年6月高杏：江苏部分地区2012．2013年猪圆环病毒2型的分离鉴定及其致病性研究江苏部分地区2012—2013年猪圆环病毒2型的分离鉴定及其致病性研究摘要从1997年起猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype2，PCV2)

2、已是研究最热的猪病原之一，作为仅次于猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)的第二大严重危害世界养猪业的病毒，PCV2已呈全球范围内流行。自2000年我国报道PCV2以来，PCV2所致的发病率和死亡率始终居高不下。为了持续监测猪体中PCV2的带毒和变异情况，本研究于2012．2013年对江苏部分地区病死猪的临床病料进行PCV2、伪狂犬病毒(Porcinepseudorabiesvirus，PRV)、猪细小病毒(Porcineparvovirus，PPV)、猪瘟病毒(Classicalswi

3、nefevervirus，CSFV)和PRRSV五种常见病原的PCR检测，并用Dulac细胞对PCV2的阳性病料进行分离纯化。对分离的PCV2进行全基因序列测定和遗传进化分析，比较不同亚型PCV2b毒株在Dulac细胞和低母源抗体商品猪上的感染特性，从而为我国PCV2的流行情况和致病性研究提供依据。1．2012．2013年江苏部分地区PCV2及几种常见病原的流行病学调查用PCR方法对江苏部分地区的164份病死猪病料五种常见病原进行检测，结果70份病料为PCV2阳性，阳性率42．7％；29份病料为CSFV阳性，阳性率为17．7％；16份病料为PRV阳性，阳性率为9．8％；12份病料为

4、PPV阳性，阳性率为7．3％；4份病料为PRRSV阳性，阳性率为2．4％；其中在混合感染中，以PCV2和CSFV的混合感染率最高，有9份，占总数的5．4％；PCV2和PRV的混合感染有8份，占总数的4．8％，排第二位；PCV2和PPV的混合感染有4份，占总数的2．4％，排第三位。2．2012．2013年江苏部分地区PCV2的分离鉴定和全基因组序列的遗传进化分析为了解江苏部分地区PCV2毒株的流行特点，本文对2012．2013年采集的病料中分离的38株PCV2扩增病毒全基因组，测序并绘制遗传进化树。结果表明，分离株全长为1768bp的1株，其余37株为1767bp。这些毒株分属PCV

5、2b和PCV2a两个基因型，其中37株PCV2b中有11株属1B亚型，26株属1C亚型；其余1株为PCV2a基因型。对38株II扬州大学硕士论文PCV2ORF2编码氨基酸序列比对分析表明，PCV2基因型及亚型具有其特异的氨基酸变异位点。而2012．2013年间江苏部分地区的PCV2流行毒株主要为PCV2b1C亚型。3．PCV2b毒株的致病性研究为比较PCV2b1B和1C亚型毒株的致病性差异，从本实验室保存的毒株中选择毒株121108(1B)和毒株130405(1C)。通过测定Dulac细胞在接种病毒后第1，2，3，4，5d上清液中PCV2的TCID50和DNA拷贝数，来比较两株PC

6、V2在该细胞上的生长差异。同时为比较它们在动物体内的感染差异，随机将8头试验猪分为3组：阴性对照组2头；感染PCV2b1B(121108)组3头；感染PCV2b1C(130405)组3头。接种后第7、14、21d采集血样检测PCV2的抗体和DNA水平。结果表明：在Dulae细胞上，与毒株130405(PCV2blC)相比，毒株121108(PCV2b1B)在上清液中的感染滴度和病毒拷贝数均高出10倍(P<0．01)。在动物体内，起初毒株121108(PCV2b1B)就处在较高的复制水平，两毒株在攻毒后第7d均达到复制水平的高峰。比较攻毒后第14、21d试验猪血清中PCV2DNA拷贝

7、数发现，121108组显著高于130405组(P<0．05)。攻毒后21d的剖检结果也表明，121108组试验猪淋巴结和各脏器的大体和显微病变都比130405组严重。121108组试验猪的淋巴结出现多核巨细胞和嗜酸性粒细胞，且有大量的淋巴细胞缺失，130405组未见多核巨细胞，淋巴细胞缺失也较少。免疫组化结果也表明121108组试验猪的淋巴结和扁桃体中分布的PCV2抗原更多。总而言之，本文研究结果表明，1B亚型毒株121108的感染性明显强于1C亚型毒株130405。