猪圆环病毒2型2010 AHCY 株的分离鉴定及遗传变异分析-论文.pdf

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1、华北农学报·２０１３，２８（６）：７７-８１猪圆环病毒2型2010AHCY株的分离鉴定及遗传变异分析１１３１，２１１王小敏，何孔旺，王东田，周忠涛，茅爱华，俞正玉，１１１１１１汪伟，倪艳秀，温立斌，张雪寒，郭容利，李彬（１．江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京２１００１４；２．南京农业大学动物医学院，江苏南京２１００９５；３．山东省蓬莱市村里集镇畜牧兽医工作站，山东蓬莱２６５６０４）摘要：旨为分离得到１株猪圆环病毒２型毒株，对其生物学特性进行鉴定，测定其ＴＣＩＤ５０，并进行全基因组比对分析。利用细胞传代的方法对ＰＣＲ检测为

2、ＰＣＶ１阴性、ＰＣＶ２阳性的病料进行病毒分离，分离毒株接种ＰＫ１５细胞，通过ＰＣＲ检测和间接免疫荧光进行鉴定。并对分离株的ＴＣＩＤ５０和全基因组序列进行了测定与分析。成功分离得到猪圆４．２３环病毒２型，命名为２０１０ＡＨＣＹ株，其基因组全长为１７６７ｂｐ，在ＰＫ１５细胞上的ＴＣＩＤ５０为１０。全基因组序列分析表明，该分离株与其他参考毒株核苷酸同源性为９３．２％～９９．９％，与ＨＭ０３８０３０ＰＣＶ２ｄ的同源性最高，为９９．９％。系统进化树分析表明，分离株２０１０ＡＨＣＹ属于ＰＣＶ２ｄ基因型，与ＰＣＶ２ｂ基因型亲缘关系较近。为分析华东地区ＰＣＶ２分子流行病学、遗传变异和ＰＭＷＳ的防治奠定了基础。

3、关键词：猪圆环病毒２型；分离；鉴定；遗传变异中图分类号：Ｑ７８文献标识码：Ａ文章编号：１０００－７０９１（２０１３）０６－００７７－０５Isolation，IdentificationandGeneticVariationofPorcineCircovirusType2Isolate2010AHCY１１３１，２１ＷＡＮＧＸｉａｏ-ｍｉｎ，ＨＥＫｏｎｇ-ｗａｎｇ，ＷＡＮＧＤｏｎｇ-ｔｉａｎ，ＺＨＯＵＺｈｏｎｇ-ｔａｏ，ＭＡＯＡｉ-ｈｕａ，１１１１１１１ＹＵＺｈｅｎｇ-ｙｕ，ＷＡＮＧＷｅｉ，ＮＩＹａｎ-ｘｉｕ，ＷＥＮＬｉ-ｂｉｎ，ＺＨＡＮＧＸｕｅ-ｈａｎ，ＧＵＯＲｏｎｇ-ｌｉ，ＬＩＢｉｎ（１．Ｉｎ

4、ｓｔｉｔｕｔｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＪｉａｎｇｓｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＢｉｏ-ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００１４，Ｃｈｉｎａ；２．ＴｈｅＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００

5、９５，Ｃｈｉｎａ；３．ＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎｏｆＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅｏｆＣｕｎｌｉｊｉＴｏｗｎ，Ｐｅｎｇｌａｉ２６５６０４，Ｃｈｉｎａ）Abstract：Ｔｈｅａｉｍｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｏｂｔａｉｎｔｈｅｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２（ＰＣＶ２）ｉｓｏｌａｔｅ２０１０ＡＨＣＹａｎｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｉｔｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ａｎｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅ５０％ｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｉｎｆｅｃｔｉｖｅｄｏｓｅ（ＴＣＩＤ５０）ａｎｄｔｈｅｗｈｏｌｅｇｅｎｏｍｅｏｆｔｈｉｓｉｓｏｌａｔ

6、ｅ．ＴｈｅｓａｍｐｌｅｓｗｈｉｃｈｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄＰＣＶ１ｎｅｇａｔｉｖｅａｎｄＰＣＶ２ｐｏｓｉｔｉｖｅｗｅｒｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄａｎｄｐａｓ-ｓａｇｅｄｏｎＰＫ１５ｃｅｌｌｓ．ＴｈｅｉｓｏｌａｔｅｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲａｎｄｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｓｓａｙ（ＩＦＡ）．ＴｈｅＴＣＩＤ５０ｏｆ２０１０ＡＨＣＹｉｓｏｌａｔｅｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄａｎｄｔｈｅｗｈｏｌｅｇｅｎｏｍｅｗａｓｓｅｑｕｅｎｃｅｄａｎｄｉｔｓｍｏｌｅｃｕｌａｒｖａｒｉａｔｉｏｎｓｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＤＮＡＳｔａｒｓｏｆｔｗａｒｅ．ＡＰＣＶ２ｓｔｒａｉｎ２０１

7、０ＡＨＣＹｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｓａｍｐｌｅｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ４．２３ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｇｅｎｏｍｅｌｅｎｇｔｈｏｆ２０１０ＡＨＣＹｗａｓ１７６７ｂｐａｎｄｔｈｅＴＣＩＤ５０ｗａｓ１０．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅｇｅｎｏｍｉｃｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆ２０１０ＡＨＣＹａｎｄｏｔｈｅｒｓｔｒａｉｎｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａ