五唇兰根部内生细菌筛选及其促生效应研究

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1、硕士学位论文题目：五唇兰根部内生细菌筛选及其促生效应研究作者：张芳芳指导教师：朱国鹏研究员专业：风景园林学ScreenandGrowth-promotingEffectofEndophyticBacteriafromPhalaenopsispulcherrimaRootsAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinEngineeringByZhangFang-fangSupervisor:^Major:LandscapeArchitect

2、ureUSubmittedtime:May,2015海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原备性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，猹立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容夕卜，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：叙芩芎■曰期》胖丄月巧曰学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电

3、子版；允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟高校用户提供文献传递服务和交换菔务。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。！论文作者签名：导师签名‘日期年月日日期％岸日本人已经认真阋读“高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：口半年：口一年；口二年发布。论文作者签名：叙妥芩导师签期年月对日曰期：摘要兰科植物

4、是典型的菌根共生植物，菌根真菌是其赖以生存的营养来源。而菌根共生并非只是真菌与植物的共生，还包括内生细菌。内生细菌可影响兰科植物菌根形成和共生关系的稳定性，在兰科植物的生活史中起着重要作用。本研究以东南亚特有种五唇兰为研宄对象，采集来自不同生境的野生植株的新鲜营养根进行内生细菌的分离，进行形态学和分子鉴定，分析不同生境五唇兰内生细菌的多样性，再以五唇兰成熟种子和无菌组培苗为回接对象进行促生细菌筛选，丰富五唇兰内生细菌资源。同时，为探讨兰科植物内生细菌的促生机理，本研宄又开展了促生菌株的植物促生活性检测。最后，结合株五唇兰促生内生真菌：毛

5、壳抱属、漆斑菌属、盘多孢属和球座菌属，非措抗筛选后混合接种于五唇兰无菌组培苗，旨在初步探讨内生真菌与内生细菌互作对五唇兰生长的影响。主要结果如下：本研宄采用组织破碎与稀释涂布法分离来自为林下落叶层和生在石头上的野生五唇兰植株根部内生细菌株，其中从在林下落叶层中生长的五唇兰植株中分离出内生细菌株、从生在石头上的五唇兰植株中分离出内生细菌株，分别占总数的和。采用形态鉴定与分子鉴定相结合的方法对株内生细菌进行鉴定，细菌序列划分个。两种生境的五唇兰内生细菌共分个属，分别是芽孢杆菌属、伯克氏菌属、草酸菌属（、土壤杆菌属、类芽孢轩菌属、泛菌属、、欧

6、文氏菌属，其中芽孢杆菌属、伯克氏菌属、泛菌属占是五唇兰内生细菌的优势属。对五唇兰内生细菌进行分析与多样性分析表明其多样性受生境的影响，土生型的多样性水平比石生型高，林下枯枝落叶层最有利于五唇兰内生细菌的生长。根据鉴定结果挑选出株代表菌株分别接种于五唇兰种子和组培苗培养天，结果表明，种内生细菌对种子的萌发有促进作用；种内生细菌（，，，，、能不同程度地促进五唇兰组培苗的生长。，既可显著促进五唇兰种子的萌发又可显著促进组培苗的生长，这株内生细菌在五唇兰的不同的生长时期都有着重要的作用。株促生细菌中只有类芽孢杆菌属（对五唇兰组培苗的各个形态指标

7、、干重和鲜重增长率等多方面有显著性的影响。(4)对株内生细菌进行促生活性分析，株细菌具有固氮能力；株内生细菌具有溶解无机磷的能力，溶磷量范围为，；株细菌具有产能力，产范围为。株细菌具有合成铁载体能力。、和同时具有固氮、溶碟、产和合成铁的能力。高浓度的有利于五唇兰种子的萌发但不利于后续的生长发育；兼顾固氮性和可分泌能力的内生细菌促生效果更好。株五唇兰促生真菌与株五唇兰促生细菌进行平板对峙非拮抗筛选共有组有拮抗作用，组为非拮抗作用。将株非拮抗组合与五唇兰组培苗共培养天获得组处理苗的鲜重净增长率、干重等生物量都能明显高于不接菌，表现出了促生的

8、效果。将组组培苗与单接菌组培苗相比，筛选出个优势组合，分别为、和。优势组合组培苗的干重和鲜重明显高于对照，呈现出协同效应，具有重要的研宄价值。关键词：五唇兰；内生细菌；共生萌发；植物促生活性；互作Abstr