华石斛根部可培养内生细菌分离鉴定及其促生研究

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1、硕士学位论文题目：华石斛根部可培养内生细菌分离鉴定及其促生研究作者：李骜指导教师：宋希强教授专业：风景园林学时间：二一五年五月IdentificationofCulturableEndophyticBacteriaandGrowth-promotingEffect，海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和

2、集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：乂日期⑶《年月日学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟髙校用户提供文献传递服务和交换服务。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名意导师签名曰期年丄月曰曰期年

3、（月砧曰本人已经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中，发布，并可按“章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：□半年：‘年：口二年发布。论文作者签名：导师签名曰恥么丨年：月力曰曰期年月讲兰科植物作为典型的菌根植物，其重要的营养来源是菌根真菌。但是兰科植物共生微生物并不是只有真菌，也包含植物内生细菌。兰科植物菌根构建和共生系统的稳定性都受到内生细菌影响，兰科植物内生细菌对兰科植物的生活史起着重要作甩。本研宄以华石斛为研究对象，在三个华石斛居群采集野生植

4、株对根部进行内生细菌的分离，并进行鉴定，分析不同居群华石斛内生细菌多样性，对分离得到的内生细菌从溶磷性、固氮性、合成和螯合铁载体四个方面进行促生潜力的测定，再以华石斛无菌组培苗为回接对象进行促生效应研究，结合促生潜力和促生效应研究结果，以获得对华石解无根组培苗生长有益的内生细菌，丰富兰科植物内生细菌资源。主要结果如下：野生华石斛植株釆集及根部内生细菌分离从三个野生华石斛居群，在旱、雨两季共釆集植株株，采用传统分离培养法纯化获得株内生细菌。并且对分离得到的内生细菌选用斜面低温保存法和甘油超低温保存法两种方式进行保存

5、。野生华石斛内生细菌的鉴定对活化后具有活性的株华石斛内生细菌进行基因序列分析经序列测定显示，分离自野生华石斛根部的株内生细菌分属个已知属，属于个菌种，其中优势种群为及，是华石斛根部内生细菌分离频率最高的菌属；次优势种群为和。和在三个华石斛居群均被分离到，它们可能对华石斛内生细菌群落结构起到了重要作用。霸王岭和吊罗山的华石斛根部内生细菌群落相似性最高，相似系数为其次是尖峰岭和吊罗山，相似系数为霸王岭和尖峰岭的华石斛根部内生细菌群落相似性最低，相似系数为。霸王岭采集的华石斛植株根部分离得到全部个已知种中的个菌种共株菌

6、，在种类丰富度上显示出了优势，说明可能霸王岭地区的小生境在三个居群中更适合野生华石斛植株和内生细菌共生生长。野生华石斛内生细菌促生潜力从溶磷性、固氮性、分泌能力、合成铁载体能力四个方面对分离得到的内生细菌进行促生潜力的研究发现，个菌种具有溶解磷酸三钙的能力，有效磷增量为，其中有效碟增量最大的菌株是。、、、、、这个菌种明显固氣活性。个菌种具有分泌的能力，其中的分泌能力最强，分泌量达。、、、、、weihenstephmensis6个菌种具有螯合铁载体的能力。野生华石斛根部分离得到的种内生细菌中有种菌具有至少一种促生活

7、性，都是具有促生潜力的微生物资源，、这种菌株同时具备溶磷性、固氮性、分泌和合成铁载体能力，可能对华石斛的生长过程具有至关重要的作用。野生华石斛促生效应从野生华石斛植株分离得到的种内生细菌中，除株内生细菌致死外，其余株均对华石斛无根组培苗具有不同程度、不同方面的促生作用。其中、在全部六个方面对华石斛无根组培苗具有显著的促进作用，在五个方面具有显著促进作用，在促生效应研究中表现突出，可能对华石斛的生长过程具有至关重要的作用。促生潜力实验结果与促生效应实验的结果基本一致。所以综上所诉，、、等很有可能是极其重要的微生物资

8、源。关键词：溶磷性；固氮性；；螯合铁；微生物资源AbstractAsthetypicalmycorrhizalplants,theorchid'simportantsourceofnutritionismycorrhizalfungi.Infact,mycorrhizaisnotjustasymbiosisbetweenfongiandplants,butthereare