霍山石斛内生真菌的分离及其促生作用的研究

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1、分类号密级单位代码学号名微震业大学学位论文霍山石斛内生真菌的分离及其促生作用的研究IsolationandCultureofEndophyticFungiAssocilatedwithnhuoshanenseanditsEffectsonthegrowthOfplantlets研究生：王娣指导教师：墓丞洼教援申请学位门类级别：理堂亟±——专业名称：生物物理堂研究方向：——塞业生物物理所在学院：生盒型堂院答辩委员会主席年月摘要本文以国家重点保护的药用植物霍山石斛(DendrobiumhuoshanenseC．z．Tangets．J．cheng)为研究材料，采用常规内生真菌的分离方法，以马铃薯

2、蔗糖培养基为分离培养基，从霍山石斛的根部分离得到3株内生真菌；通过与霍山石斛试管苗的共培养实验，发现其中的1株内生真菌(编号SH．01)对霍山石斛试管苗的生长有显著的促进作用；实验就SH．Ol对霍山石斛试管苗生长的影响进行了研究。1．从85个石斛根段中，分离得到3株内生真菌，通过形态学观察初步鉴定分别隶属于半知菌亚门丝孢纲的枝顶孢霉属和柱孢霉属。2．通过共培养，从分离得到的3株内生真菌中，筛选出1株对霍山石斛试管菌生长有显著促进作用的内生真菌(SH．01)，该菌株与霍山石斛试管苗共培养30d时，霍山石斛试管苗增重量是对照增重量的1．22倍，株高的增加量达到对照增加量的1．69倍。且多次重复

3、实验证明，SH-01对霍山石斛试管苗的生长有显著的促进作用。3．研究了内生真菌SH．01的培养特性，并以菌丝体生物量为指标对其培养条件进行优化，综合实验结果和经济因素，筛选出SH．01的最佳培养条件为：2009／L马铃薯+lOg／L蔗糖+SVL蛋白胨+39／L磷酸二氢钾+1．5edL硫酸镁，pH6．0。4，初步建立了内生真菌与霍山石斛试管苗的共培养体系。共培养的最佳条件为1／2MS+10∥L蔗糖+lOg／L琼脂，pH5．8。5．研究了内生真菌SH-01对霍山石斛试管苗生长的影响。结果表明，在共培养30d和60d时，与内生真菌SH．01共培养的霍山石斛试管苗的鲜重、株高的增加幅度均显著高于对

4、照(P<0．05)。且在促进霍山石斛试管苗生长的同时，该内生真菌对石斛主要有效成分石斛多糖和生物碱的积累并没有影响。研究中还发现，共培养60d时，霍山石斛试管苗鲜重、株高和分蘖与对照相比的增加率都要低于共培养30d时鲜重、株高和分蘖的增加率，表明随着共培养时问的增加，该内生真菌对霍山石斛试管苗的促生作用减弱了。霍山石斛试管苗与内生真菌SH．01共培养移栽后，霍山石斛试管苗鲜重、移栽成活率比较对照有一定提高，但未达到显著水平。6．研究了内生真菌SH一01发酵液对霍山石斛试管苗生长的影响。结果表明，在霍山石斛试管苗的培养基中加入一定体积的内生真菌SH-01的发酵液，可以显著促进霍出石斛试管苗的

5、生长。关键词：霍山石斛、内生真菌、试管苗、共培养、有效成分、发酵液IsolationandCultureofEndophyticFungiAssocilatedwithAhuoshanenseanditsEffectsonthegrowthofplantletsAbstractDendroiumSW．isthesecondlargegenusinOrchidaceaeinwhichmanyspeciespossessmedicalfunctionandthereforehavebeenvaluabletraditionalChinesemedicine(TCM)formanyyears．T

6、hreeendophyticfungistrainswereisolatedfromthewildD．huoshanense(DendrobiumhuoshanenseC．z．TangetS．J．Cheng)rootsbyusingsolidifiedpotatodextroseagat(PDA)．TheseendophyticfungistrainswereculturedwithD．huoshanenseandtheresultsindicatedthatoneofthemcouldpromotethegrowthoftheplantobviously．Themainresearchr

7、esultsasfollowed：1．Threeendophyticfungistrainswereisolatedfrom85plagmentsoftherootsofwildD．huoshanenseandtheywereclassifiedtoDeuteromycotinaandblongtotwodifferentgenus．2．Oneendophyticfungusstrainthatcouldpromotet