花生促生内生细菌筛选和多样性分析

《花生促生内生细菌筛选和多样性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、山东农业大学硕士学位论文中文摘要植物内生细菌是广泛定殖的各种健康植物的组织和器官中，与寄主植物和谐共存、相互影响的一类微生物，是具有促生和提高植物抗病抗逆能力的有益微生物资源。为了筛选花生促生内生细菌，得到有自主知识产权的应用菌株，本研究以幼苗期、开花下针期、荚果期和成果期四个生育时期的花生植株为材料，筛选IAA产生菌、拮抗菌和产铁载体细菌；采用16S．RFLP和16SrDNA系统发育分析对花生植株的各个生育期的内生细菌多样性进行了初步研究。通过75％的乙醇和3％次氯酸钠相结合的方法对花生植株进行表面消毒处理，结果显示，7

2、5％乙醇浸泡3min，3％次氯酸钠溶液处理2min，75％乙醇浸泡30s的处理方法能很好的达到消毒效果。采用R2A培养基分离花生内生细菌，结果显示，内生细菌的菌落密度在2．6x104cfu／gFW到7．1x104cfu／gFW之间，其中成果期内生细菌的数量最少为2．6x104efu／gFw，荚果期内生细菌的数量最多为7．1×104cfu／gFW。结合菌落和细菌形态观察，共纯化分离得到94株内生细菌，其中幼苗期22株、开花下针期28株、荚果期30株、成果期14株。16S．RFLP分析发现，94株内生细菌在92％的水平上聚为1

3、4个大群，而在100％的水平上聚为29个群。根据聚类分析图，选择3l株代表性菌株进行了16SrDNA序列测定，结果显示，94株内生细菌共分为14个属，至少26个种。其中芽孢杆菌属(Bucillus)为优势菌群，且在这四个生育期都有分离到。肠杆菌属(Enterobacter)只在花生幼苗期分离到：微小杆菌属(Exiguobacterium)、不动杆菌属(Acinetobacter)只在开花下针期分离到；黄杆菌属(Flavobacterium)只在荚果期分离到：根瘤菌属(Rhizobium)、细杆菌属(Microbacteri

4、um)和伯克氏菌属(Burkholderia)只在成果期分离到。而节杆菌属(Arthrobacter)在幼苗期和荚果期都能分离到，而在另外两个生育期没有分离到。本实验共分离到48株具有产L蚣能力的菌株，14株拮抗菌，3株产铁载体菌株。其中产IAA能力较强(>50mg·L"1"OD600‘1)的菌株主要是巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)，成团泛生菌(Pantoeaagglomer．ans)、阿氏肠杆菌(Enterobacterasburiae)和根瘤菌属(Rhizobiumsp．)。14株拮抗菌中，2株对

5、花生白绢病原菌(Sclerotiumrolfsii)有较弱的拮抗效果，12株对辣椒根腐病原菌(Fusariumsolani)、苹果炭疽病原菌(Colletotrichumgloeosporioides)、芹菜灰霉病原菌(BotrytiscinemaPers．)和黄瓜霜霉病原菌(Pseudoperonosporacubensis)有拮抗效果。3株铁载体产生菌都属于假单胞菌花生促生内生细菌的筛选和多样性分析属(Pseudomonas)。其中2株茵同时具有产生铁载体能力、产IAA和拮抗能力；11株菌同时具有产生IAA和拮抗能力。

6、共获得51株促生和拮抗菌种，为菌种资源的开发应用奠定了基础。关键词：花生；内生细菌；多样性；促生；拮抗2山东农业大学硕士学位论文一-⋯--●一-●-ScreeninganddiversityanalysisofplantgrowthpromotingendophyticbacteriafrompeanutAbstractEndophticbacteriaresidewithintheinnerpartsofvariousplanthostswithoutcausingdiseasesymptoms．Theyinfluenc

7、eeachotherandformanorganicunity．Manyendophticbacteriaarebeneficialmicrobialresourcesforimprovingplantgrowthandabilitiesofantidiseaseandantiadversity．Inordertoscreentheplantgrowthpromotingendophyticbacteriaisolatesofpeanutandobminthebacterialstrain、析thproprietaryin

8、tellectualpropertyrights，theIAA-producingstains，antagonisticstainsandsiderophore-producingstainswereisolatedfromthepeanutplant．Thepeanutplantsweresample