中韩刺参（apostichopus japonicus）杂交与自交子一代抗逆性比较及其甲基化分析

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1、学校代码：10264研究生学号：M120101023上海海洋大学硕士学位论文中韩刺参（Apostichopusjaponicus）杂交题目：与自交子一代抗逆性比较及其甲基化分析ComparativeStudyOnStressResistanceAndMethylationAmongTheInbredAnd英文题目：HybridOffspringsForChineseAndKoreaSeaCucumber（ApostichopusJaponicus）专业：水产养殖研究方向：水产动物遗传育种姓名：范超晶指导教师：孙慧玲研究员二O一五

2、年四月三日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。

3、本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注李琪中国海洋大学教授主席李勇中国科学院海洋研究所研究员委员孙慧玲黄海水产研究所研究员委员张岩黄海水产研究所研究员委员常青黄海水产研究所研究员委员高菲黄海水产研究所副研究员秘书答辩地点黄海所1号楼4楼会议室答辩日期2015年6月8日

4、上海海洋大学硕士学位论文中韩刺参（Apostichopusjaponicus）杂交与自交子一代抗逆性比较及其甲基化分析摘要针对目前刺参（Apostichopusjaponicus）养殖中存在的刺参种质退化、抗逆性下降等问题，本研究以刺参中国群体及引进的韩国群体作为育种材料，采用完全双列杂交法进行种内群体间杂交以及群体内自繁，获得了自交和杂交子一代，比较了中韩杂交与自交刺参对高温和盐度的耐受性，以及对干露胁迫的免疫应答的异同，最后分析了自交和杂交子一代基因组DNA甲基化水平。主要研究结果如下：一、中韩刺参杂交与自交子一代高温与盐度

5、耐受性比较刺参中国养殖群体（C）和韩国野生群体（K）进行完全地双列杂交，得到四个交配组合C（♀）×C（♂）（CC）、K（♀）×K（♂）（KK）、K（♀）×C（♂）(KC)和C（♀）×K（♂）(CK)。各交配组合的子一代刺参在16℃，盐度为30‰的海水中暂养一周，然后转移到盐度或温度按以下四种方式改变的实验海水中：1）实验海水盐度以2‰/h的速率上升或者下降，2）刺参被迅速转移到梯度的高盐度（36,38,40,42,44‰）或者低盐度（21,19,17,15,13,11‰）的海水中，3）实验海水温度以1℃/h的速率上升，4）刺参被

6、转移到梯度的高温海水（27,28,29,30,31℃）中。统计单个实验中刺参的存活率。结果表明，温度突变时，两杂交组的半数致死高温ULT50（upperlethaltemperature50）高于韩国自交组，但是低于中国自交组（P<0.05）。温度渐升时C（♀）×K（♂）组半数致死高温50%UST高于其它三组刺参。对于盐度突变时的半数致死高盐ULS50(upperlethalsalinity50），两杂交组显著高于韩国自交组（P<0.05）。盐度渐变时，C（♀）×K（♂）刺参的半数致死高盐50%USS（uppersurvival

7、salinity）显著高于韩国自交组刺参。盐度突降或者渐降时，K（♀）×C（♂）刺参的半数致死低盐LLS50（lowerlethalsalinity50）和50%LSS都是最低的，与韩国自交组有显著的差异。实验说明，中韩杂交刺参在温度和盐度耐受性方面有一定的杂种优势，意味着通过杂交育种，刺参的抗逆性能得到有效的改善。二、中韩刺参杂交和自交子一代对干露胁迫的非特异性免疫应答比较I上海海洋大学硕士学位论文研究了干露胁迫对中韩刺参自交和杂交子一代的非特异性免疫指标的影响。结果表明，四组刺参的体腔液细胞的初始吞噬活性为CK>KC>CC>

8、KK，但没有显著性差异，胁迫后四组刺参吞噬活性显著地降低。胁迫开始前两杂交组刺参CK，KC的CAT活性和SOD活性显著高于自交组刺参CC，KK。胁迫开始后四种刺参的过氧化氢酶CAT活性和超氧化物歧化酶SOD活性显著升高。经过1h干露胁迫后，CK、KC组刺参的CA