补肾通络方药效物质基础及基于tgf-β1ctgf因子的作用机制研究

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1、分类号：学校代码：级学号：：◎湖南中医药大学博士学位论文补肾通络方药效物质基础及基于因子的作用机制研宄学科专业：中西医结合临床研究方向：中西医结合肾病作者姓名：刘湘丹导师姓名、职称：卢岳华教授学位类型：科学学位中国湖南长沙二零一五年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南中医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的

2、说明。作者签名：⋯年月曰关于学位论文使用授权说明本人了解湖南中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被査阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。本研究获以下课题资助、湖南省教育厅财政厅重点项目“补肾通络方对大鼠肾间质和蛋白表达的影响”、湖南省教育厅大学生创新项目“补肾通络方中丹参素在大鼠体内的药动学研究’’创造性成果简介本研究首次建立了可用于补肾通络方稠浸膏中马钱苷、阿魏酸和二苯乙烯苷

3、质量控制的方法。本研究自创了操作方便、安全性好的大鼠断尾釆血固定装置。首次建立了灌胃补肾通络方后大鼠血浆中马钱苷、阿魏酸和二苯乙烯苷的方法并进行了药代动力学分析。研究表明，补肾通络方中以上三种成分药动学曲线均符合血管外给药二室模型，且三种成分吸收快，马钱苷和二苯乙烯苷消除速度中等，阿魏酸消除慢但生物利用度为最高，一天给药次能维持血药浓度，该方可制成普通口服制剂，为临床用药和新药开发提供了参考。血浆药理学研究发现，补肾通络方能改善由白介素介导的大鼠肾小球系膜细胞增殖和相关因子的表达，肾小球系膜细胞增殖与白介素（、转化生长

4、因子、结缔组政生长因子和转化生长因子诱导早期基因，细胞因子密切相关；抑制因子，调节的功能为补肾通络方临床治疗及其衍生疾病的可能作用机制，抗和治疗为中药复方有效治疗病的靶点。围绕以上内容，作者攻读博士学位期间以第一作者公开发表学术论文篇（中国药房、中国中西医结合肾病杂志、中国中药杂志），以第二作者公开发表学术论文篇（局解手术学杂志，湖南师范大学学报自然科学版），参与湖南省教育厅财政厅重点项目项（排名第二），指导主持湖南省大学生创新项目项。中文摘要目的：建立补肾通络方稠浸膏前处理方法和同时测定其中马钱苷、阿魏酸和二苯乙烯苷

5、含量的分析方法。建立同时测定灌胃补肾通络方稠浸膏大鼠血浆中马钱苷、阿魏酸和二苯乙烯苷含量的方法，并探究目标成分在大鼠体内的药代动力学行为特征，探讨补肾通络方的药效物质基础。通过体外血浆药理学研究，探讨补肾通络方干预肾间质纤维化的作用机制。方法：以阿魏酸、二苯乙烯苷、马钱苷为检测指标，用正交设计表，选择乙醇用量、乙醇浓度及醇沉时间个因素，采用方差分析优选出制备补肾通络方稠浸膏的方法；同时检测以上三种成分的条件为：色谱柱为流动相为甲醇冰醋酸水溶液（，检测波长为马钱苷）、阿魏酸和二苯乙烯苷），柱温为，流速为进样量为叫。取雄性

6、大鼠，自制采血固定器，进行大鼠药代动力学断尾釆血，并分别于给药前及灌胃给药后、、、、、、、、、、、、、各时间点断尾采血左右，离心取血浆。采用液液萃取法处理血浆样品，同时检测血浆中马钱苷、阿魏酸和二苯乙稀苦的条件为：色谱柱为流动相为甲醇冰醋酸水溶液，梯度洗脱，流速为，柱温为°检测波长为马钱苷）、阿魏酸和二苯乙烯苷），进样量为；用软件进行药动参数计算。取雄性大鼠，按高、中、低个剂量灌胃补肾通络方稠浸膏天，末次灌胃给药后左右腹主动脉采血，离心取血浆备用。以肾小球系膜细胞为试验对象，白介素为炎症干预因子，福辛普利为阳性药物，设

7、空白血浆对照组、白介素组、福辛普利组、补肾通络方稠浸膏高、中、低剂量组，共组。法检测细胞活力；检测基因表达量；法检测、和蛋白含量。结果：补肾通络方稠浸膏最佳前处理方法为：倍量乙醇静置提取浓缩；含量测定的方法学考察表明：马钱苷、阿魏酸和二苯乙烯苷的质量浓度分别在、、范围内与各自峰面积呈良好线性关系（分别为，，；检测限依次为、和叫，定量限依次为、和精密度试验小于，稳定性、重复性试验均小于；平均加样回收率分别为、和；补肾通络方稠浸膏中马钱苷、阿魏酸和二苯乙烯苷的质量浓度分别为，。自制断尾采血固定器制作较简单，且操作方便，一天

8、可对只大鼠重复采血次，出血量，无大鼠死亡及操作人员受伤情况；血药浓度的方法学考察表明：血浆中内源性物质不干扰样品的测定，马钱苷、阿魏酸和二苯乙烯苷质量浓度分别在、和范围内与各自峰面积呈良好线性关系分别为，，；检测限依次为、和呢，定量限依次为、和；提取回收率分别大于、和日间、日内精密度（均分别小于、和大鼠血浆中马钱苷、阿魏酸和二苯乙