白塞病新自身抗原的筛选与应用

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1、密级：紐博士置学?1952?位论文论文题目：白塞病新自身抗原的筛选与应用学号：作者：荀一萍专业名称：环境工程年月日北京科技大学学位论文使用授权书本人完全同意《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》以下简称“章程”），愿意将本人的学位论文提交“中国学术期刊（光盘版）电子杂志社”在《中国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》中全文发表。《中国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》可以以电子、网络及其他数字媒体形式公开出版，并同意编入《中国知识资源总库》，在《中国博硕士学位论文评价数据库》中

2、使用和在互联网上传播，同意按“章程”规定享受相关权益。作者签名：导师签名：年《月日年学号学院色》学位类别博士学位年度论文题目注：请将该授权书与学位论文一并送交学院教务员老师。白塞病新自身抗原的筛选与应用研究生姓名：荀一萍指导教师姓名：闫海北京科技大学土木与环境工程学院北京，中国，分类号：糾：密级：单位代码：北京科技大学博士学位论文白塞病新自身抗原的蹄选与应用论文题目：荀一萍作者指导教师闰海化学与生物工程学院■单位：指导小组成杜宏武化学与生物工程学院员：单位论文提交日期：年月日学位授予单位：北京科技大学北京科技大学博士学位论文致谢本论

3、文在进行课题研究和论文撰写过程中，得到了很多老师和同学的热情指导和无私帮助。在此，谨向所有关心、培养和帮助过我的老师及同学表示深深的敬意和衷心的感谢，特别是同海老师和杜宏武老师。他们严肃的科学态度，严谨的治学精神，精益求精的工作作风，幵阔的科研思维深深地感染和激励着我。从课题的选择到项目的最终完成，始终给予我细心的指导、不懈的支持与充分的信任。两位老师不仅在学业上给我以精心指导，同时还在思想、生活上给我以无微不至的关怀，为我树立了良好的榜样与人生坐标。感谢所有化学与生物工程学院的老师，感谢所有为我上课的老师们，感谢您们给予我知识，带

4、我领略生物学的美妙与精深。感谢国家兴奋剂检测中心的吴侔天老师和军事医学科学院陈光宇老师对本课题的支持和指导。感谢实验室的所有兄弟姐妹们，也感谢所有生物工程系的同学们，感谢我们一起讨论，一起争执，一起克服困难，一起走过的快乐时光。感谢国家自然科学基金为我的课题提供资金支持。北京科技大学博士学位论文摘要白塞病（是一种可能与遗传因素、环境微生物感染、以及其他病人生活环境因素等相关的系统性自身免疫性疾病。目前已有证据表明该疾病在相对高发的亚洲人群中具有一些特殊遗传位点，但与环境微生物感染方面的相关性仍需要更多的实验证据。本课题采用五种人源细

5、胞系对患者的血清自身抗体谱进行测定，通过分析不同细胞免疫荧光强度的差异，选取人脐静脉内皮细胞（为可用于特异性抗原分子筛选的靶细胞。然后分别采用一维分离技术（免疫印迹和免疫沉淀）和二维分离技术（双向电泳联合个体全蛋白质组生物芯片）对细胞裂解液中的能够与患者血清抗体特异性识别的靶蛋白进行筛选。实验结果表明，在本课题构建的一维和二维实验体系中，分别成功筛选出一个新的疾病相关自身抗原。经过质谱进行序列鉴定，确定其分别为抗增殖蛋白和微管蛋白。然后，通过分子克隆和发酵表达，分别获得大量纯化的重组蛋白。接着制备对应的酶免检测试剂盒，进行临床验证和

6、疾病症状关联性分析。结果表明，抗抗体和抗抗体在我国汉族患者的血清水平均较健康组有显著性差异（。本课题首次在我国汉族患者血清中发现抗抗体和抗抗体的存在，且上述两种新发现自身抗体所对应的抗原与微生物热激蛋白相关；提示病菌感染、病人的生活环境等的确都可能参与发病进程，为该疾病的发病机制和分子诊断研究提供了一定有益信息。关键词：白塞病，自身免疫性疾病，自身抗原，自身抗体，微生物感染北京科技大学博士学位论文，，北京科技人学博士学位论文目录■缩写清单弓文献综述环境因素与自身免疫疾病塞病发病机制治疗方案抗原筛选的方法分子文库免疫沉淀蛋白质芯片双向

7、凝胶电泳质谱研究内容与意义实验材料与方法实验试剂实验仪器主要试剂配制实验方法细胞培养间接免疫荧光检测细胞回收及总蛋白质的定量免疫沉淀细胞总提取与制备目的蛋白的克隆、表达和纯化白塞病新自身抗原的筛选与应用芯片印迹数据分析靶细胞的筛选血清孵育条件的优化细胞间接免疫荧光检测结果与讨论血清孵育条件优化的结果间接免疫荧光检测的结果间接免疫荧光检测的结果间接免疫荧光检测的结果间接免疫荧光检测的结果间接免疫荧光检测的结果小结靶抗原的筛选细胞筛选条件的优化蹄选抗原免疫沉淀验证结果与讨论细胞的结果膜优化的结果血清稀释比优化的结果筛选紀抗原的结果免疫沉

8、淀验证的结果小结目的蛋白的鉴定及克隆表达目的蛋白的鉴定目的蛋白的制备目的蛋白的活性验证结果与讨论鉴定的结果检索目的蛋白信息扩增目的片段北京科技大学博士学位论文双酶切产物连接及验证目的蛋白的诱导表达重组的活性验证结果桃检测平台在中的应用