病死猪堆肥高温降解菌的筛菌、鉴定及其应用研究

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1、：１０：３６４分类号：Ｑ９３单位代码＿密级：１２７２０４１３：号学么後展！０：丈等学位论文病死猪堆肥高温降解菌的筛菌、鉴定及其应用研究ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＴｈｅｒｍｏｈｉｌｉｃＢａｃｔｅｒｉｕｍｐＳｔｒａｉｎｓｗｉ化陆ｈＤｅｒａｄａｔｉｏｎａｎｄ化ｅＥｆｆｅｃｔｓｏｎＤｅａｄＰｉｇｇｇＣｏｍｏｓｔｉｎｐｇ研究生：李海龙指导教师：李目木研究员：申请学位［］类级另。理学硕ｄｒ专业名称：微生物学研究方向：

2、畜牧微生物学所在学院：生命科学学院答辩委员会主席：ｒ？２０１５年５月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。。：穀时间／玉研究生签名奪；三年备月ｇ日关于论文使用授权的说明本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，

3、即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可采巧影印、缩印或媒扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意安徽农业大学可Ｗ用不同方式在不同体上发表、传播学位论文的全部或部分此内容。（保密研的学位论文在解密后应遵守协议）究生签名：乐藏准时间：少年／月含／曰一第导师签名时间年６月多日摘要为探索堆肥法在病死猪无害化方面的应用，从锯末和病死猪（粉碎）好氧堆肥样品中筛选具有高效降解蛋白质和脂肪的高温菌株，并研究其对病死猪粉碎后的堆肥效果。本研究采用稀释平板法和选择培养基初筛与酶活性复筛相结合的方4法进行筛菌。然后对筛选到的

4、菌株进行16SrDNA鉴定，并采用L9(3)正交设计对菌株的培养温度、pH、振荡频率及通气量四因素进行优化。最后以粉碎后的病死猪为原料，辅以锯末调节碳氮比，采用单因素4水平3重复试验设计进行堆8肥试验，研究由筛选菌株组成的微生物菌剂（体积比N-3:Y-3=1:1，浓度10CFU/mL）的不同添加量(0.3%、0.6%、0.9%)对堆肥过程中温度、含水率、大肠菌群、病死猪降解率、全氮、全磷、全钾、速效氮、速效磷、速效钾及蛋白酶、脂肪酶、脲酶、脱氢酶酶活的影响。结果表明，从样品中分离得到一株高效降解蛋白质的高温细菌N-3和一株高效降解脂肪的高温菌株Y-3。经鉴

5、定，菌株N-3的16SrDNA基因全序列总长1450bp与芽孢杆菌属的多个菌株具有同源性，与BacillusaestuariiJP1的同源性达到99.5%；菌株Y-3的16SrDNA基因全序列总长1463bp，与Geobacillus属的多个菌株具有同源性，与Geobacillussp.SY-9同源性为99.2%。据此判定菌株N-3和Y-3分别为芽孢杆菌胞菌(Bacillusaestuarii)和嗜热脱氮芽孢杆菌(Geobacillusthermodenitrificans)。发酵罐优化结果表明，N-3在生长温度为55℃，pH值7.2，振荡频率200r/m

6、in，通气量4L/min条件下8培养时菌数最高，达到5.87×10CFU/mL；Y-3在温度60℃，pH值7.2，振荡频8率300r/min，通气量3L/min条件下培养时菌数最高，达到6.53×10CFU/mL。病死猪堆肥试验表明，堆肥过程中对照组和接菌量0.3%、0.6%和0.9%各组最高温度分别为58.3℃、69.0℃、68.9℃、66.3℃，各接菌组间差异不显著(P>0.05)，但均极显著高于对照组(P<0.01)，且各接菌组堆肥温度达到60℃以上天数分别为8d、10d、9d，极显著高于对照组的0d(P<0.01)。大肠菌群计数表明，对照组和接菌各

7、组分别在堆肥第15d和第10d时达到无害化要求。至堆肥结束时，对照组和接菌各组的病死猪降解率分别为71.2%、75.7%、96.7%、97.1%。接菌各组(0.3%接菌组除外)病死猪降解率均极显著高于对照组(P<0.01)，0.3%接菌组与对照组间无显著差异(P>0.05)。在堆肥结束时，对照组和接菌量0.3%、0.6%和0.9%各处理组全氮含量分别为1.80%、1.67%、1.83%和1.69%，全磷含量分别为1.68%、1.85%、2.11%和2.17%，全钾含量分别为0.53%、0.57%、0.61%和0.60%，速效氮含量分别为2.61g/kg、2

8、.70g/kg、2.63g/kg和2.60g/kg，速效磷含量分别