三氯乙烯降解菌的分离鉴定及其降解特性

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1、王新新等：三氯乙烯降解菌的分离鉴定及其降解特性1783三氯乙烯降解菌的分离鉴定及其降解特性王新新1,2，张颖1*，韩斯琴1，王元芬1,2，李慧11.中国科学院沈阳应用生态研究所陆地生态过程重点实验室，辽宁沈阳110016；2.中国科学院研究生院，北京100049摘要：三氯乙烯是一种具有“三致”效应的有机氯代烃化合物，作为一种重要的化工原料在工业上广泛应用，同时也造成了大量的三氯乙烯进入自然环境，引起了严重的环境污染。为获得更为丰富的三氯乙烯降解微生物资源，利用水-硅油双相系统从实验室高浓度三氯乙烯胁迫底泥中，分离筛选得到两株三氯乙烯降解

2、菌WF1、FT10。在三氯乙烯初始质量浓度为5mg·L-1的条件下，培养72h，菌WF1、FT10对三氯乙烯的降解率分别为53.36%、48.06%；在500mg·L-1乙酸钠作为共代谢基质的情况下，降解率分别为55.95%、55.62%，降解速率明显提高。根据形态学观察、16项生理生化实验和16SrRNA序列分析结果，将菌株WT1归为Achromobacterxylosoxidans，将菌株FT10归为Sporosarcinaaquimarina。对菌株培养条件进行优化，经SlideWrite统计软件拟合，菌株WT1和FT10在牛肉膏

3、蛋白胨液体培养基上的最适生长温度分别为33.7℃和35.4℃，最适生长pH分别为7.6和7.9。关键词：三氯乙烯；降解菌；分离鉴定；底泥；无色杆菌；八叠球菌中图分类号：X172文献标识码：A文章编号：1672-2175（2008）05-1778-06王新新等：三氯乙烯降解菌的分离鉴定及其降解特性1783三氯乙烯是一种易挥发的有机氯代烃化合物，作为一种优良的溶剂广泛应用于多个行业。由于不合理的废水排放和意外泄露，它被大量释放到环境中，成为底泥水体中常见的污染物之一[1]。因其分布广泛且具有致畸、致癌、致突变等潜在危险[2-3]，许多国家都

4、已将其列入优先控制污染物黑名单[4]，因此探索高效便捷的处理方式具有重要意义。利用微生物降解三氯乙烯的方法具有去除率高、成本低等优点，因而在三氯乙烯污染治理中备受关注[5-6]。目前国际上已经分离到了可以降解三氯乙烯的多种微生物，主要有Pseudomonas、Methylocystis、Xanthobacter、Methylosinus、Desulfuromonas、Alcaligenes、Ralstonia、Burkholderia、Mycobacterium、Janibacter、Nitrosomonas等[7-10]，然而国内三氯

5、乙烯污染治理相关的研究甚少，三氯乙烯降解菌方面的研究更为罕见。本研究从实验室高浓度三氯乙烯污染底泥中，经富集驯化筛选得到两株三氯乙烯降解菌，通过菌种鉴定确定其分类地位，并探索了降解菌的最适培养条件，以期为修复三氯乙烯污染提供理论依据。1实验材料与方法1.1仪器GNP-9080型恒温培养箱、GLC-3型超净工作台、LDZX-40型自动高温灭菌锅、HZQ-C型气浴恒温摇床、PTC-100TM型PCR仪、GENIE-2型旋涡混合器、5415C型高速离心机、DYY-6B型电泳仪、Bio-Rad凝胶呈像系统、XSP-8CZ型显微镜、752型紫外可

6、见分光光度计、Agilentһ6890气相色谱仪。1.2实验材料主要试剂：三氯乙烯、硅油（聚甲基硅醇）、蛋白酶K、TaKaRaAgaroseGelDNAPurification试剂盒、10×PCRReactionBuffer、10mMdNTPMixture、TaqDNA聚合酶。无机盐培养基：K2HPO41g·L-1，KH2PO41g·L-1，NaCl0.5g·L-1，NH4Cl1g·L-1，MgSO4·7H2O0.2g·L-1，CaCl215mg·L-1，FeSO4·7H2O2mg·L-1，CuSO4·5H2O0.4mg·L-1，KI1

7、mg·L-1，MnSO4·H2O4mg·L-1，H3BO35mg·L-1，CoCl2·6H2O1mg·L-1，Na2MoO4·2H2O2mg·L-1，NiCl2·6H2O2mg·L-1，pH7.0±0.2。牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5g·L-1，蛋白胨10g·L-1，NaCl5g·L-1，pH7.0±0.2。1.3菌种富集、分离纯化供试底泥采自辽河流域浑河沈阳段。采用250mL培养瓶，分别加入200g底泥样品、50mL灭菌蒸馏水，模拟底泥自然环境。加入三氯乙烯，不断提高浓度至5000mg·L-1，120r·min-1摇床25℃恒温富集培

8、养90d。在150mL三角瓶中分别加入80mL无机盐培养基和20mL硅油[11]，添加三氯乙烯使其终浓度为500mg·L-1，加入2g上述经富集培养的底泥，150r·min-1摇床25℃恒温培养。每隔7d取