活化态肝星状细胞分泌il-8促进肝癌血管生成

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1、中山大学博士毕业论文编号：12111100中山大学博士学位论文活化态肝星状细胞分泌IL-8促进肝癌血管生成专业：外科学学位申请人：朱冰导师：许瑞云教授答辩委员会主席：成员：中山大学附属第三医院广州510630二零一五年三月中山大学博士毕业论文DoctoralThesisofSunYat-senUniversityActivatedHepaticStellateCellsPromoteAngiogenesisviaIL-8inHepatocellularCarcinomaMajor:SurgeryName:BingZhuSupervisor:Prof.RuiYunXuOralDef

2、enseCommitteeTheThirdAffiliatedHospitalofSunYat-SenUniversityGuangzhou,510630,ThePeople’sRepublicofChinaMarch,2015中山大学博士毕业论文论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日中山大学博士毕业论

3、文活化态肝星状细胞分泌IL-8促进肝癌血管生成专业：外科学博士生：朱冰导师：许瑞云教授摘要目的与意义肝细胞癌是全球最常见的恶性实体肿瘤之一，中国的肝细胞癌发病率位居全球首位。尽管随着医学的发展，肝细胞癌的治疗有了一定的进展，但是肝细胞癌患者的无瘤生存率以及总生存率仍未令人满意。据统计，肝细胞癌患者即使获得根治性手术切除，60-70%的患者5年之内仍会出现复发与转移。因此肝细胞癌的生长、复发与转移的影响因素和调控机制是目前亟需解决的问题。既往对肝细胞癌发生发展、复发与转移主要集中在肝癌细胞的研究上。但越来越多的证据表明：肝细胞癌的发生发展不仅由肝癌细胞本身决定，肝癌微环境也起到一个

4、至关重要的作用。在肝癌微环境中，肝癌细胞与其周围间质的相互作用决定了肝细胞癌的血管生成、复发与转移。研究表明：肝癌微环境由活化态肝星状细胞、内皮细胞、上皮细胞、免疫细胞、各种代谢产物以及细胞外基质组成。其中，活化态肝星状细胞是肝细胞癌间质中的主要细胞，其分泌趋化因子和细胞因子等在肝细胞癌的血管生成、生长与转移方面发挥着重要作用，并且直接影响I中山大学博士毕业论文肝细胞癌的临床预后。肝星状细胞分为静止状态和活化状态两种形态。在炎症、肿瘤等刺激下，静止状态转化为活化状态。研究发现活化态肝星状细胞不仅能够促进肿瘤侵袭性增加和肿瘤细胞生长，而且还能够趋化大量的血管内皮细胞进入肝细胞癌组织

5、中，从而促进肝细胞癌的新生微血管形成。这些新生血管显著异常，呈现“动脉化或者毛细血管化”改变，最终导致肝细胞癌的发生发展、转移与复发。目前认为：微血管生成是恶性肿瘤失控的无休止过程中的一个重要环节。肝细胞癌的新生微血管生成是肝癌生长、侵袭、复发与转移的基本条件，近年来肿瘤的血管生成与抑制逐渐成为研究的重点。在对肝硬化导致的门静脉高压症的研究中，已经证实活化态肝星状细胞促使肝脏的微血管生成导致了肝脏血窦的重新塑形，最终导致了门静脉高压形成。在对肝转移性黑色素瘤的研究中发现，新生微血管最先出现在活化态肝星状细胞聚集的位置，并且新生微血管的密度与活化态肝星状细胞的数量呈正相关。这些研究

6、提示了活化态肝星状细胞参与了肝细胞癌的血管形成。前期研究结果发现：活化态肝星状细胞与肝癌细胞不同比例混合形成移植瘤后，分析发现随着活化态肝星状细胞的比例增加，肝癌的体积以及血管密度也随之增加。然而，目前有关活化态肝星状细胞如何影响肝细胞癌血管生成的机制仍未完全明了。例如：活化态肝星状细胞分泌何种细胞因子？如何作用于肝癌细胞促进肝细胞癌的微血管生成？为了解决这些疑问，本课题拟通过建立活化态肝星状细胞上清处理肝癌细胞体系，对肝癌细胞的促血管作用作进一步研究：①通过液态芯片、酶联免疫吸附测定等实验方法检测活化态肝星状细胞是否分泌炎症趋化因子。②通过血管形成实验、鸡胚绒毛尿囊膜实验研究炎

7、症趋化因子IL-8促血管生成作用。③通过免疫印迹等方法分析p-STAT3信号通路在炎症趋化因子IL-8II中山大学博士毕业论文调控血管生成中的作用。这些研究将有助于我们了解肝细胞癌的微血管形成机制，并为肝细胞癌的治疗提供新的思路。第一部分肝星状细胞、人脐静脉内皮细胞的分离和表型鉴定一、材料与方法1.实验标本来源所有人肝癌标本均取自中山大学附属第三医院肝胆外科2013年1月至2014年1月期间手术切除的病例，肝癌患者在手术之前未经历任何局部或者系统的治疗。人脐静脉取自中山大学附属第