汉防己甲素对伊曲康唑和伏立康唑抗烟曲霉增效活性及其主要机制研究

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1、暨南大学硕士学位论文题名：汉防己甲素对伊曲康唑和伏立康唑抗烟曲霉增效活性及其主要机制研究AninvitroandinvivostudyonthesynergisticeffectandmainmechanismofitraconazoleorvoriconazolealoneandincombinationwithtetrandrineagainstAspergillusfumigatus作者姓名：李水秀指导教师姓名:张宏及学位、职称：教授学科、专业名称：皮肤病与性病学学位类型：学术型学位论文提交日期：2015-5-23论文答辩日期：2015-6-3答辩委员会主席：席丽艳教授

2、论文评阅人：学位授予单位和日期：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部

3、分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编摘要目的探讨汉防己甲素（tetrandrine，TET）对伊曲康唑（itraconazole，ITR）和伏立康唑（voriconazole，VRC）抗烟曲霉有无增效活性及其主要增效机制。方法参照M38-A方案的微量稀释法，以23株烟曲霉临床株为研究对象，测定TET对其的最大非细胞毒性剂量和ITR、VRC单独及联合TET对其的最小抑菌浓度（min

4、imalinhibitoryconcentrations，MICs）；参照M38-A2方案的棋盘微量稀释法，测定ITR或VRC单独及联合TET抗23株烟曲霉临床株活性，结合FICI（fractionalinhibitoryconcentrationindex）法和ΔE法对其结果进行评价；用时间-杀菌曲线法动态观察TET对ITR或VRC体外抗敏感株AF17和耐药株AF23活性。以烟曲霉构建小鼠系统感染模型，ITR或VRC单独及联合TET治疗后，从生存率和病原学判断其作用效果；用R6G外排法和RT-PCR法分别测定外排泵功能及其相关基因MDR1、MDR2、MDR3、MDR4和AT

5、RF于ITR或VRC单独及联合TET作用后的相对表达量。结果TET抗烟曲霉的最大非细胞毒性剂量为80µg/mL。ITR单独及联合TET对烟曲霉的MIC值范围分别为0.5µg/mL～32µg/mL和0.0625µg/mL～4µg/mL，差异有统计学意义（P＜0.05）；VRC单独及联合TET的MIC值范围分别为0.25µg/mL～2µg/mL和0.03125µg/mL～0.25µg/mL，差异有统计学意义（P＜0.05）；ITR联合TET作用时，ITR的MIC值由0.125~32µg/mL降至0.0625~2µg/mL，TET的MIC值由256~512µg/mL降至8~64µg

6、/mL，FICI和ΔE法评价均表现为协同作用；VRC联合TET作用时，VRC的MIC值由0.125~2µg/mL降至0.03~0.5µg/mL，TET的MIC值由256~512µg/mL降至8~256µg/mL，FICI和ΔE法评价17株菌表现为协同作用，6株菌表现为无关作用；时间杀菌曲线示：不同浓度的ITR或VRC联合TET比其单独作用均降低烟曲霉的细胞活性，并且缩短抑菌作用的时间。IITR或VRC联合TET比其单独作用均可提高小鼠的生存率(P＜0.05)和降低肾、脑负荷的烟曲霉菌量(P＜0.05)。TET可减少烟曲霉对R6G的外排；ITR或VRC联合TET比其单独作用的外

7、排泵基因MDR2、MDR3、MDR4和ATRF低表达（P＜0.05）。结论汉防己甲素在体外及小鼠体内对伊曲康唑和伏立康唑抗烟曲霉有增效活性；其增效活性与其抑制药物外排功能有关，可能与下调外排泵基因MDR2、MDR3、MDR4和ATRF的表达有关。关键词：汉防己甲素；伊曲康唑；伏立康唑；烟曲霉；增效作用；机制IIABSTRACTObjectivesToinvestigatethesynergisticeffectandmainmechanismofitraconazole(ITR)orvoriconazo