抗结核新型化合物的筛选、初步评价及表面展示siv gag抗原的重组耻垢分枝杆菌的构建

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2、ｏｎｔｈｅｓｕｒｆａｃｅ学号Ｄ１２２０１０７９姓名王邦兴学位类别理学硕士生物化学与分子生物学ｆｘｌｔｍ指导教师张天宇完成时间２０１５年５月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字曰

3、期：Ｍｌ年月／曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，、可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：＞＞欠年Ｄｉ月曰签字曰期：７。＾年月曰｜ｙ！夕摘要Ｔ一ｕｂｅｒｃｕ，Ｔ）结核病（ｌｏｓｉｓＢ是全球危害最大的传染病之。耐药ＴＢ的

4、出现及ＴＢ与艾滋病病毒（ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＶｉｒｕｓ，ＨＩＶ）共感染使人类对抗ＴＢ新药的需求更为迫切。然而传统的抗ＴＢ药物研发模式所需周期长、成本４０ＴＢ。ＴＢ高，在长达多年的时间里，没有抗新药诞生本实验利用新型的抗药一物蹄选模型，成功旳筛选到种化合物（５ｋ），在体内和体外的评价中都表现出一良好的杀菌活性。利用该模型，可以在体内外连续检测同样品，实验过程中不需要添加任何底物－，仅需３５天便可以对药物活性进行快速评价，灵敏度高，重Ｈ－ｌＭｆｒ复性强。在活性检测中：使用无抗性的自主发光的３７Ｒａ

5、（Ｓｅｅｃｔａｂ丨ｅａｒｋｅｒｅｅＡｕ一ｔｏｌｕｍｉｎｅｎｔＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＨ３７Ｒａ，ＵＡｌＲａ）对系列化合物进行初蹄，筛选出包括５ｋ在内的数十个具有体外杀菌活性的新型化合物；用无抗性自３７Ｒｖ－主发光的Ｈ（ＳｅｌｅｃｔａｂｌｅＭａｒｋｅｒｆｒｅｅＡｕｔｏｌｕｍｉｎｅｎｔＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ一Ｈ３７ＲＶ，，ＵＡｌＲｖ）对这些化合物的杀菌活性做进步验证发现５ｋ的体外杀菌效果较好，５ｋ；并且对于临床耐药菌株也有较好的杀菌活性。在体内对于药物活

6、性的检测中，使用不同剂量的５ｋ对感染ＵＡｌＲａ的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行治疗，发现５ｋ在体内也表现出较强的杀菌效果，其杀菌效果与药物剂量呈正相关性，并且没有表现出体内毒性。初步的体内评价表明５ｋ有希望成为抗ＴＢ新药。一一ＨＩＶ自人类首次发现艾滋病以来，科研人员直致力于研发种安全有效的疫苗。科研人员经过３０多年潜心研究，提出ＨＩＶ疫苗需要诱发机体多重免疫反应。，疫苗诱导产生的抗体可以在病毒感染时中和部分病毒这样，其后以细胞免疫应答为主的免疫反应能够清除被病毒感染的细胞，从而降低ＨＩＶ载量，并减少ＨＩＶ的传播效率，达到预防与治疗

7、的双重目的。近年来，由于性传播途径成为ＨＩＶ传播的主要方式，所以能够诱发机体粘膜免疫反应的分枝杆菌疫苗载体在疫苗研发ＩＶ－１Ｅｎｖｃｏｂａｃ中越来越受到重视。将Ｈ的抗原展示在耻拒分枝杆菌（Ｍｙｔｅｒｉｕｍｓｍｅｇｍａｔｉｓ，Ｍｓｍｅｇ）表面，构建ＨＩＶ疫苗，检测发现，该疫苗可以诱发机体长期的粘膜免疫反应，并且抗原表达在表面的免疫效果好于抗原表达在胞内。对ＨＩＶ患者体内的免疫应答和病毒载量进行比较，可以发现只有当针对Ｇａｇ的反应更强Ｉ抗结核新型化合物的蹄选、初步评价及表面展示ＳＩＶＧａ抗原的重组耻塘分枝杆菌的构建ｇ

8、时，病毒载量才会下降，。基于以上成果本实验选择了三种不同载体蛋白的表面展示系统，在新型的无任何毒力的Ｍｓｍｅｇ疫苗载体