巨片形吸虫病诊断抗原的筛选及相关重组蛋白的诊断价值评价

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1、单位代码：８４５０１ｊ！学号：５８４５０１１２０２２，，硕±学位论文ＩＩ〇国■■ｍＩ疾巨片形吸虫病诊断抗原的筛选及Ｉ相关重绝蜜白的诊断价值评价＾－空，ｒ．Ｎ研究生：王月ｍ含制培养单位：中国疾控中瓜寄畫虫病所！｜±１之Ｉ导师：许学年研究员〇、／己巨片形吸虫病诊断抗原的筛迭及相关重组蛋白的诊断价值评价ＳｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄＥｖａ虹ａｔｉｏｎｏｆＦａｓｄｏ虹ｉａｎｔｉｃＡｎｔｉｅｎｓｉｂｒｇｇｇＤｉａｎｏｓｉｓｏｆＦａｓｃｉｏｌｉａｓ

2、ｉｓｇ王月棋２０巧年５月学位论文原创性、真实隹声明本人郑重声明：《巨片形吸虫病诊断抗原的筛选及相关重组蛋白的诊断价值评价》是本人在中国疾病预防控制中也《病原生物学》专业攻读硕±学位期间，在导师指导下完成的硕±学位论文。我承诺；本论文中所涉及的所有数据、试验记录Ｗ及研究结果均真实可信，引用资料己注明出处，无飄窃、篡改、抄袭之行为。如本论文原创性方面出现问题，我愿负法律责任。本课题的研究成果归中国疾病预防控制中也所有，发表文章的单位署名为中国疾病预防控制中也。特此声明！学位论文作者（签名）

3、：研究生导师（签名）：２０１５年月日２０／乐日１５年月＾目录１摘要ＡＢＳＴＲＡＣＴ３骼言５一第部分巨片形吸虫巧诊斯抗原基因的筛选与克隆９弓憎９椅解雜９结果２１楠３７第二部分巨片形吸虫诊断候选抗原的原核表达及纯化３９引胃３９ｕｍｍ３９结果４９小Ｓ５７第兰部分重级爱白的诊断价值的５９引胃５９好供施５９淵６３小ＩＩ７０好论７１结絶７５参考文献７７ｍ７９附俾１（发表的论文）８１照件

4、２（发表的综述）８６中英文全稼及绪写好照￣中文全巧巧文（拉Ｔ文）全称翁写居托驚喂無Ｆａｓｃｔｏｌ幻．ｇｉｇａｎｔｉｃ幻Ｆｉｇ排姗分泌統廣＊ａｅｃｒｅｏｒｎｅｎＥＳＡｅｘｃｒｅｔｅｄｔｙａｔｉｇ互补口ＮＡｃｃｍｔＤＮＡＤＮＡｐｌｅｍｅｎａｒｙｃ巧放阅读框ＯｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅＯＲＦ醒免麵试验歷ＩｎｕＳＴ三譜忠巧单克隆抗体ＭｏｎｏｃｌｏｎｄａｎｔｉｂｂｄＭＡｂｙ碱性縣酸酶ＡｌｋａＫｉ＾ＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅＡＰ鍊根过氧化酶曲ｒｓｅｒａｄｉｓｈｅｒｏ

5、ｘｉｄａｓｅＨＲＰｐ巧巧欄罗【目的】本研巧采用巨片形吸虫病患者血清免疫学筛选巨片形吸虫（Ｆａｓ础？虹ｇ醉每）成虫的ｃＤＮＡ表达文库，寻找巨片形吸虫病血清学诊断的候选抗原，，选择巨片形吸虫特异基因进斤克隆和表法并评化重组蛋白的诊断价值。【方法】本文（通１＾＾采集自云南大理农贸市场牛巧胆管内的成虫为材料＾１、－巧３１２两隔区和＾＾），过形态学鉴定及〇〇？１］３＜１１等分子鉴定确认虫种为３提取ＲＮＡ一ＲＮＡＺＡＰ口ＤＮＡ表达文库巨片成虫总，并进步纯化为ｒａ，构建；＼＜ｃ；用ｃＤＮＡ表达文库

6、。形吸虫病患者混合血清筛选，获得阳性克隆将阳性克隆进行测序，并且经过ＢＬＡＳＴ比对等生物信息学分析筛选候选诊断抗原基因；将获得的目的基因扩增Ｉ构建重姐质粒，进斤原核表达与纯化；用间接ＥＬＩＳＡ方法ｉ平价重姐蛋白的诊断价值。【结果】从巨片形吸虫ｃＤＮＡ文库初步筛选到５６个阳性克隆，经过二筛、兰筛Ｗ及正常人血清复筛后最终获得巧个阳性克隆，经ＤＮＡ序列测序，通过ＢＬＡＳＴ分析比对，除去线粒体基因及与其他物种高同源性基因，剩余的１１个基因共分为４大类，分别为组织蛋白酶Ｌ蛋白（ＣＬ）、硫氧还蛋白过氧化物酶（ＴＰｘ）、銷

7、脂激活蛋白样蛋白２（ＳＡＰ２）和卵黄蛋白Ｂ２（ＶＢ２），其中ＴＰｘ、ＳＡＰ２和ＶＢ２在往报道中未见对人体巨片形吸虫病诊断的深入研巧，故将ＴＰｘ、ＳＡＰ２和ＶＢ２一进斤步研究。三类重组蛋白均成功表达并纯化，通过间接ＥＬＩＳＡ法对Ｈ类重组蛋白的免。疫反应性进斤检验，结果显示ＴＰｘ和ＳＡＰ２的表泣产物有较好的免疫反应性＾Ｊｌ纯化并复性的重组蛋白为检测抗原，ＥＬＩＳＡ［通过间接方法检测巨片形吸虫病患者血清中的特异性抗体．７％，特，该ｍＳＡ法的敏感性为６６异性为％８％，总体符合率８７．６％，与血吸虫病人、华支睾吸虫病人

8、血清交叉反３３＋０．０％（０／１５）／１．２应率分别为和６．７％（１５）治疗前后血清０Ｄ值分别为０；００８８和化１２９＋００７２二者＜００５）．．，存在明显差异化．