慢病毒介导的牛病毒性腹泻病毒e0蛋白在mdbk细胞中表达

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1、：分类号：Ｓ８５５．３单位代码１０３６４２０２３９：：１２７密级学号签傲余必；学位论文慢病毒介导的牛病毒性腹泻病毒Ｅ０蛋白在ＭＤＢＫ细施中表达ＥｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢｏｖｉｎｅＶｉｒａｌＤｉａｒｒｈｅａＶｉｒｕｓＥＯＰｒｏｔｅｉｎｉｎｐＭＤＢＫＣｅｌｌＭｅｄｉａｔｅｄｂｙｅｎｔｉｖｉｒｕｓＬ研究生：刘軍指导教师：魏津忠教授合作指导教师：章余刚研究员申请学化口类级别：农学硕古专业名称：预防兽睽学研究方向：家畜传梁

2、病学，所在学院：动槪科巧学院答辩委员会主席：名，峰為ＸＪ二零一五年六月AnhuiAgriculturalUniversityDissertationfortheMasterateExpressionofBovineViralDiarrheaVirusE0ProteininMDBKCellMediatedbyLentivirusCandidate:LiuJunSupervisor:Prof.WeiJianzhongCooperantSupervirsor:Prof.ZhangJingangAcademi

3、cDegreeappliedfor:MasterofAgricultureSpeciality:PreventiveVeterinaryScienceResearchfield:InfectiousdiseasesofdomesticanimalsCollege:AnimalScienceandTechnologyCollegeJune,2015独创性声明本人芦明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研巧工作及取得的研巧成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研巧成果，也不包

4、含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证巧而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间曰：文年占月《关于论文使用授权的说明本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，可Ｗ采用影印、缩印或扫描，允许论文被查阅和借阅等复制手段保存、汇编学位论文。同意安徽农业大学可レ义用不同方式在不同媒体．ｈ发表、传播学位论文的全部或部分内容。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）■：等时

5、间＾研究生签名：年月３Ｈ’一第；１导师签名：７时间＞！又年月ＳＨ摘要牛病毒性腹泻病毒(Bovineviraldiarrheavirus,BVDV)为黄病毒科（Flaviviridae），瘟病毒属（Pestivirus）成员，其感染的宿主范围较广，包括牛、羊、鹿、猪等。黄病毒科成员之间基因组的同源性较高，血清学上存在交叉反应，并能够突破宿主特异性发生交叉感染，从而增加了该病原的诊断和疾病预防的难度。序列分析表明BVDVE0基因的保守性较高，E0蛋白具有一定的免疫原性，此外该蛋白还具有RNase活性，因此成为研究疾病感染机

6、制、开辟防治疾病新途径的主要靶蛋白，同时也具备生产基因工程诊断抗原和基因工程亚单位疫苗的潜力。本研究通过比对GenBank中登录的22株BVDVE0基因序列，其中牛源病毒12株：OregonC24V（AF091605.1）、NADL（AJ133738.1）、Singer（DQ088995.2）、SD1（M96751.1）、Osloss（M96687.1）、Changchun184（JN704144.1）、JZ05-1（GQ888686.2）、SH2210-17（HG426493.1）、GS5（KJ541471.1）、Powder（JN

7、380089.1）、Riems（AY078406.1）、10JJ-SKR（KC757383.1），羊源病毒6株：VM（U75982.1）、21372（U75976.1）、R2727（U00891.1）、Ind51966（EU371402.1）、47（U75978.1）、21800（U75977.1），猪源病毒3株：SD0803（JN400273.1）、ZM-95（AF526381.3）、SH-28（HQ258810.1）以及鹿源病毒1株：CCSYD（FJ555203.1）。选择我国最早分离且流行较为广泛的1b基因亚型的Changchu

8、n184株E0基因序列进行合成。根据E0核酸序列设计并合成引入IgK信号肽、预测信号肽、His标签以及NheⅠ酶切位点的上下游引物，以pGSI-E0为模板，通过PCR分别扩增出含有IgK信号肽、预测信号肽以及不含信号肽的