补阳还五汤对特发性肺纤维化小鼠mTOR_ULK1蛋白表达的影响

《补阳还五汤对特发性肺纤维化小鼠mTOR_ULK1蛋白表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、成都中医药大学硕士学位论文学位论文补阳还五汤对特发性肺纤维化小鼠mTOR/ULK1蛋白表达的影响EffectofBuyangHuanwuDecoctiononmTOR/ULK1ProteinExpressioninMicewithIdiopathiPulmonaryFibrosis王丽娟指导教师：王飞教授申请学位级别：硕士专业名称：中医内科学论文提交时间：2018.4论文答辩时间：2018.5基金项目：国家青年基金（81503557）二○一八年五月成都中医药大学硕士学位论文中文摘要目的：通过建立特

2、发性肺纤维化小鼠模型，研究补阳还五汤对肺纤维化小鼠形成及进展过程中mTOR/ULK1蛋白的影响，明确补阳还五汤抗肺纤维化的作用机理。方法：144只8周龄，平均体重20±2g的C57/BL6雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、强的松组、补阳还五汤高、中、低剂量组，每组各24只。除假手术组外，其余各组采用一次性气道滴注硫酸博来霉素方法建立肺纤维化小鼠模型，造模成功后各组每天一次灌胃给药。假手术组与模型组为0.9%生理盐水-1-110ml·kg，强的松组给予醋酸泼尼松片6mg·kg，补阳还五汤高、中、低各

3、-1-1-1剂量组分别为28.08g·kg、14.04g·kg、7.02g·kg,连续给药28天。各组分别于第7、14、28天随机取6只小鼠处死，留取肺组织标本，以HE、Masson染色法评价不同时间点各组小鼠肺泡炎及肺组织纤维化程度，免疫组化法测肺组织中p-mTOR、ULK1、α-SMA蛋白表达水平，WesternBlot法检测α-SMA蛋白表达情况，电镜下观察自噬体表达。结果：1.一般情况：假手术组小鼠各时间点精神抖擞，机警灵敏，体重增加，毛发光亮，饮食、排便正常。模型组小鼠7天时间内精神状态

4、最差，精神不振，反应迟钝，动作缓慢，进食、饮水明显减少，随着时间推移，体重先下降后缓慢上升。补阳还五汤和强的松组小鼠，精神较好，反应敏捷，体重逐步增加，毛发光泽，饮食、排便基本正常。但比假手术组稍差，比模型组好。2.肺泡炎进程：假手术组各时间点肺泡结构清晰，未见明显炎症反应。模型组：7天肺泡结构轻度破坏，局部肺泡壁破坏，并可见大量炎症细胞浸润；14天肺泡壁明显增厚，间隔增宽，并伴有少量炎性细胞浸润，可见较多成纤维细胞；28天肺组织大范围实质化，少量炎性细胞浸润，可见大量成纤维细胞。强的松组：7天肺

5、泡结构轻度破坏，肺泡腔内可见较多炎性细胞浸润；14天、28天局部肺泡壁增厚，可见少量炎性细和成纤维细胞，28天成纤维细胞较14天增多。补阳还五汤7天1成都中医药大学硕士学位论文各剂量组可见少量炎性细胞，14天、28天肺组织局部小范围实质化，与模型组相比有不同程度的改善。3.肺纤维化进程：假手术组各时间点肺泡结构清晰，未见纤维化。模型组7天肺泡腔变小，局部肺泡壁增厚，仅见少量蓝色着染胶原增生，14天较多蓝色着染胶原增生，28天肺组织大面积实质化，纤维灶区可见大量蓝色着染胶原增生。强的松组7天局部肺泡

6、壁增厚但仅见极少量蓝色着染胶原增生，14天、28天间隔增宽伴有较多蓝色着染胶原增生。补阳还五汤各剂量组7天未见明显胶原增生，14天、28天肺泡壁增厚，蓝色胶原染色扩大加深，纤维灶区明显。4.p-mTOR蛋白表达：与假手术组比较，模型组各时间点p-mTOR均上升（P<0.05），且随着时间推移，28天达到峰值。与模型组相比，补阳还五汤各剂量组和强的松组各时间点p-mTOR表达均降低（P<0.05）。与强的松组相比，补阳还五汤高剂量组在14天、28天的p-mTOR含量下降（P<0.05）。5.ULK1

7、蛋白表达：与假手术组比较，模型组在7、14、28天的ULK1含量均有所升高（P<0.01）。与模型组相比，强的松组在7、14、28天的ULK1含量均升高（P<0.05）；与模型组相比，补阳还五汤高剂量组在14、28天的含量均升高(P<0.05)，补阳还五汤中、低剂量组在28天的含量均升高(P<0.05)。与强的松组相比，补阳还五汤中、低剂量组在28天的ULK1含量升高(P<0.05)，补阳还五汤高剂量组在14、28天的ULK1含量升高（P<0.05）。6.α-SMA蛋白表达：在免疫组化中，与假手术

8、组对比，模型组7、14、28天α-SMA蛋白表达均升高，在28天达到最高（P<0.05）。与模型组比较，补阳还五汤各剂量组及强的松组各时间点α-SMA蛋白表达均降低（P<0.05）。与强的松组相比，补阳还五汤各剂量组在14天、28天的含量均降低（P<0.05），补阳还五汤各剂量组在7天时与强的松组相比表达无明显差异（P>0.05）。在WB中，与假手术组比较，模型组肺纤维化小鼠在7、14、28天肺组织内α-SMA蛋白表达明显上调（P<0.01）。与模型组比较，补阳还五汤各剂量组与强2