新型抗体层析介质制备与应用基础研究

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1、００１７巾位代吁：１＊－５２２０１５０１３２５ｖ：＠北京石油化工ｆ学院硕士研究生学位论文题目新型抗体层析介质制备与应用基础研究研究生韦巍专业领域化学工程校内导师张荣月副教授校外导师黄永东副研究员２０１８６２５日曰期：年月北京石油化工学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体。，均已在文中以明确方式标明本人完全意识到本声明的法

2、律结果由本人承担。作者签名．ＬｌＶ：辜抓Ｖ日期：Ｍｆ关于论文使用授权的说明学位论文作者完全了解北京石油化工学院有关保留和使用学位ｓ论文的规定，卩：研宄生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属北京石油化工学院。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。□论文暂不公开注释：本学位论文属于暂不公开范围，在年＿解密后适用本授权书。□非暂不公开论文注释：本学位论文不属于暂不公开范围，适用

3、本授权书。－作者签名：Ｖｍｉ，日期：ｍ校内导师签名：日期：Ｌ学位论文数据集中图分类号Q819学科分类号530.2140论文编号1001720180132密级公开学位授予单位代码10017学位授予单位名称北京石油化工学院作者姓名韦巍学号5220150132获学位专业名称化学工程获学位专业代码085216课题来源国家自然基金项目研究方向生物化工论文题目新型抗体层析介质制备与应用基础研究关键词抗体纯化，耐碱ProteinA，动态载量，原位清洗，高度交联基质论文答辩日期2018年5月30日*论文类型应用研究学位论文评阅及答辩委员会情况姓名职称工作单位学科

4、专长校内指导教师张荣月副教授北京石油化工学院生物化工校外指导教师黄永东副研究员中科院过程工程研究所生物化工评阅人1张泽廷教授博导北京化工大学化学工程与技术评阅人2杨帆副教授中国石油大学(北京)应用化学评阅人3李浩讲师硕导河北工业大学化学分离工程评阅人4答辩委员会主席金君素教授北京化工大学化学工程答辩委员1张晓昕教授级高工石油化工科学研究院工业催化答辩委员2辛加余副研究员中科院过程工程研究所清洁能源答辩委员3李建刚教授北京石油化工学院电化学答辩委员4禹耕之教授北京石油化工学院清洁能源答辩委员5注：一.论文类型：1.产品研发2.工程设计3.应用研究4.工程/项目管理5.调

5、研报告6.其他二.中图分类号在《中国图书资料分类法》查询。三.学科分类号在中华人民共和国国家标准（GB/T13745-9）《学科分类与代码》中查询。四.论文编号由单位代码和年份及学号的后四位组成。摘要新型抗体层析介质制备与应用基础研究摘要ProteinA亲和介质因其对单抗高效捕获的特性而成为抗体纯化“金标准”一致沿用至今。在抗体工业中往往会引入原位清洗步骤以去除介质上残留的宿主细胞、内毒素和微生物等杂质，而高浓度氢氧化钠作为高效清洗剂的引入往往会对介质偶联的配基造成破坏，引起配基的脱落以及动态载量下降。为此，人们提出利用基因技术对ProteinA配基进行耐碱性改造来构

6、建耐碱型ProteinA配基。本论文设计和构建一种新型耐碱ProteinA配基，将其命名为rProteinA-ZX。为了更好对比rProteinA-ZX性能，引入商品重组配基作为对比，探究发现rProteinA-ZX比商品重组配基具有更高的亲和力，但基于Sepharose4FF基质制备介质使用0.5mol/LNaOH对其进行40次CIP操作后，其动态载量保持为初始值64%，而商品重组配基可以保持为初始值86%。通过利用聚丙烯酰胺凝胶电泳、圆二色光谱仪以及酶联免疫吸附试剂盒对碱处理的配基结构和亲和力进行探究。其中使用圆二色光谱以及酶联免疫吸附试剂盒对经碱处理0、75、1

7、50、300、450、600min后的配基二级结构中α-helix含量和浓度进行测定，发现α-helix含量和浓度变化趋势与介质动态载量在40次CIP中下降趋势一致，可以认为配基是影响介质耐碱性的关键性因素。此外对ProteinA基质进行改性，发现基于高度交联基质制备介质完成40次CIP操作后，其动态量能够保持在初始值80%，基本达到国际水平。在第一步探究中得出基质可以改善介质性能，而配基是影响介质性能的关键。因此，在第一次构建rProteinA-ZX基础上，对初始序列中相关氨基酸实施定点突变获得新配基rProteinA-PE，新构建配基与IgG获得