抗体的制备与应用

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1、抗体的制备与应用抗原决定基-抗原特异性的分子基础抗原决定基（antigenicdeterminant)指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团。是被免疫细胞识别的靶结构，也是免疫反应具有特异性的物质基础。也称为表位(epitope)。抗原决定基的位置、数目和空间结构决定抗原特异性。T细胞决定基（T细胞表位）：T细胞决定基主要位于抗原分子内部，必须由APC将抗原加工处理为小分子多肽并与MHC分子结合，然后才能被TCR所识别。B细胞决定基（B细胞表位）：BCR能直接识别未经APC加工的天然抗原，其识别的B细胞表位主要位于抗原分子的表面，与BCR具有易接近性。根据抗原决定基

2、由TCR还是BCR识别分类AntibodyStructureandFunctionpeptidepeptideepitopebindingofHV(CDR)andepitope抗体的功能V区的功能：特异性结合抗原（neutralization，中和作用）抗体结合相应抗原分子，发挥免疫效应（生理与病理）；BCR特异性识别并结合抗原分子，介导体液免疫应答。C区的功能激活补体Immunecomplex（IC）激活补体经典途径与细胞表面FcR结合1）调理作用（opsonization)；IgG或IgM的Fc段与吞噬细胞表面FcR结合促吞噬；2）抗体依赖的细胞介导的细胞毒作

3、用（Ab-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)3)介导I型超敏反应IgE的Fc段与肥大细胞表面FcR结合受体桥联细胞活化穿过胎盘和粘膜IgG通过胎盘；sIgA穿过粘膜主要内容概述多克隆抗体的制备与应用单克隆抗体的制备与应用基因工程抗体的制备与应用概述第一代抗体：多克隆抗体(polyclonalantibody，PcAb)第二代抗体：单克隆抗体(monoclonalantibody，McAb)第三代抗体：基因工程抗体(geneticengineeringantibody，GeAb)姓名国籍获奖时间主要研究成果Behrin德

4、国/日本1901抗毒素Ehrlich,Metchaikoff德国/俄国1908抗体形成Porter,Edelman英国/美国1972抗体单体的结构Kohler,Mistein德国/阿根廷1984单克隆抗体利根川进日本1987抗体多样性机制及遗传学基础第一节多克隆抗体的制备与应用（polyclonalantibody，PcAb)概念：采用含有多种抗原决定基(B细胞表位)的抗原免疫动物，从而刺激多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。因此，所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物，称为多克隆抗体。制备流程：免疫原（佐剂）免疫动物，分离抗血清，鉴定，保存。多克隆抗

5、体的制备流程传统抗血清（多克隆抗体）抗原免疫123412341234脾脏淋巴結B細胞多克隆抗体的优缺点优点：制备流程简便，操作技术要求低；制备周期短，一个月左右就能获得目的抗体；缺点：制备的抗体是针对多种抗原决定基的混合物，特异性不高，易出现交叉反应；抗体来源于动物，应用于人体会产生严重的过敏反应。应用：主要用于免疫学检测，被动免疫治疗和紧急预防。其缺点限制了其在疾病诊断和治疗中的应用。抗A抗BABCrossreactionSameepitope第二节单克隆抗体的制备与应用(monoclonalantibody，McAb)概念：通过小鼠杂交瘤细胞和单克隆抗体技术生产的

6、抗体。这种杂交瘤细胞既具有骨髓细胞能大量无限增殖的特性，又具有B细胞合成和分泌抗体的能力。每一个杂交瘤单克隆是用一个B细胞融合而产生的克隆，因此，由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的抗体，称为单克隆抗体。制备流程：免疫—融合—筛选单克隆抗体制备流程杂交瘤技术的原理1.亲本细胞的选择－小鼠骨髓瘤细胞：不产生Ig的重链和轻链；HGPRT-;TK-；与提供淋巴细胞的动物品系相同。能永生化。－免疫脾细胞：经抗原免疫的BALB/c小鼠的脾脏。不能永生化，但能分泌抗体。2.细胞融合骨髓瘤细胞PEG杂交瘤细胞脾细胞融合后细胞的类型:未融合的脾细胞杂交瘤细胞未融合的瘤细胞3.杂交

7、瘤细胞的筛选采用筛选培养基：HAT培养基H-次黄嘌呤、A-氨基喋呤、T-胸腺嘧啶只有融合成功的细胞（杂交瘤）才能在HAT培养基上长期生长，原因在于只有杂交瘤能成功合成DNA。DNA合成途径内源性途径（主要途径）利用谷氨酰胺（Gln）或单磷酸尿苷酸在二氢叶酸还原酶的催化下合成DNA(氨基喋呤是二氢叶酸还原酶的抑制剂，因此能有效阻断DNA的合成)。外源性途径（补救途径）利用次黄嘌呤或胸腺嘧啶在HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）或TK（胸腺嘧啶激酶）的催化作用下补救合成DNA融合后细胞在HAT培养基中存活情况脾细胞（HGPRT+,TK+,能生长，但