利用酵母双杂交技术研究青鳉prmt5的互作蛋白

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1、分类号密级ＵＤＣ编号ｔ钟换义《幸硕±学位论文利巧诘々及杂炎化术研免告餅Ｐｒｍ巧巧互作麥合学位申请人姓名：ｓｉｍｔ分？申请学位学生类别：全巧？！巧壬申请学位学科专业：请碱華指导教师巧名：技魏乂叛分类号密级ＵＤＣ编号中仰裝火考弟硕±学位论文利巧妊母及杂交技术研完音瓣Ｐｒｍｔ：５的互作圣局学位申请人姓名：蘇＾莎申请学位学生类别：全可制硕壬申请学位学科专业：动始学指导教师姓名：扛法娩乂援巧击学位论文？ＭＡＳＴＥＲＳＴＨＨＳＩＳ硕±学位论文利用醇母双杂

2、交技术研究青銷Ｐｒｍ巧的互作蛋白论文作者：张晓莎指导教师：赵浩斌教授学科专业：动物学研究方向：动物分子发育生物学华中师范大学生命科学学院２０１５年５月巧击学位论文＇？ＭＡＳＴＥＲＳＴＨＥＳＩＳＳｃｒｅｅｎｉｎｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓＩｎｔｅｒａｃ村ｎｇｗｉｔｈＰｒｍｔ５ｇＹｅａｓｔ－ｂｙＴｗｏＨｙｂｒｉｄＳｙｓｔ；ｅｍｉｎＭｅｄａｋａＯｒｚｉａｓｌａｔｉｅｓ，ｙｐＡＴｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉＭｅｄｉｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆｔｈｅ民ｅｕｉｒｅｍｅｎｔｑＦｏｒｔｈｅＭ

3、．ＳＤｅｇｒｅｅｉｎＢｉｏｌｏｇｙＢｙＸｉａｏｓｈａＺｈａｎｇＰｏｓｔｒａｄｕａｔｅＰｒｏｒａｍｇｇＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＣｅｎｔｒａｌＣｈｉｎａＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：ＨａｏｂｉｎＺｈａｏｐＡｃａｄｅｍｉｃＴｉｔｌｅ：ＰｒｏｆｅｓｓｏｒＳｉｇｎａｔｕｒｅＡｒｏｖｅｄｐｐＭａ２０１５ｙ，壯学位论文＇ＳＭＡＳＴＥＲＴＨＥＳＩＳ华中雕大学学位论文原雛声獅使腑权誦原准］牲方巧本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究工作所

4、取得的研究成果，。除文中己经标明引用的内容外本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，。对本文的研究做出贡献的个人和集体均己在文中Ｗ明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。作者签名：０＾日期：＜＾月１日殊｜＾＾炒年学化冷文故枝使巧蛟权书学位论文作者完全了解华中师范大学有关保留，目；、使用学位论文的规定Ｐ研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华中师范大学。学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和，可Ｗ允许采用影印借阅；学校可Ｗ公布学位论文的全部或部分内容、缩印或其它复制手段保

5、存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后遵守此规定）：保密论文注释，在年解密后适用本授权书本学位论文属于保密。，非保密论文注释：本学位论文不属于保密范围适用本授权书。作者签名：如Ｖ為导师签名曰期：Ｗ是年占月＞曰曰期：如巧年月曰占＾＂＂本人己经认真阅读ＣＡＬＩＳ高校学位论文全文数据库发布章程，同意将本＂＂＂人的学位论文提交ＣＡＬＩＳ高校学位论文全文数据库中全文发布，并可按章＂一程中的规定享受相关权益。同意论文提交后滞后＝□半年＝□年＝ｂＡ发布。作者签名：张换為导师签名：日期：Ｗ月日日期：兴々年＾月日５年矣Ｚ》硕壬学位论文

6、＇ＭＡＳＴＥＲＳＴＨＥＳＩＳ＾摘要Ｐｒｍｔ５作为第二类精氨酸甲基转移酶，在基因表达调控、ＲＮＡ加工、细胞生长分化及信号转导等方面发挥重要作用。本研究Ｗ青銷为实验材料，通过酵母双杂交ｃＤＮＡ文库扫描技术筛选Ｐｒｍｔ５的互作蛋白，并对相互作用功能结构域进行了巧步探讨。首先Ｗ青銷组织ｃＤＮＡ为模板扩増ｐｒｍＣ全长１９０５ｂｐ，构建诱巧载ＧＢＫＴ７－７Ｗ／Ｊ。ＡＨ体ＰＶ将其转入酵母１０９和Ｙ１８７细胞后，检测到诱巧蛋白对报／ＴＭ告基因无自激活能力，对宿主细胞也无毒性。其次，采用ＳＭＡＲＴ技术构建青銷鱼苗的酵母双杂交ｃＤＮＡ文库，并对文库进行扩

7、增和大规模转化。文库质量鉴￣，ｃＤＮＡ呈弥散状００３０００ｂ。ｃＤＮＡ定结果显示合成的，大小分布于１ｐ范围内初级６￣１．文库库容量约为．４ｘｌ〇ｃｆｉｉ，插入片段大小在０５３．０１ｃｂ之间，平均插入片段约为１ｋｂ，重组率为１００％。结果说明文库ｃＤＮＡ片段多样性良好，长度适合双杂－交筛选，ＧＢＫＴ７／７ｗＣ的Ｙ１８７细胞和含ｃＤＮＡ文库的ＡＨ１０９细胞。再次将含ｐｐ－Ｈ－－－－－进行杂交，通过ＳＤ／ｉｓＬｅｕＴｒｐＡｄｅ四缺营养平板和Ｘａｇａｌ显色筛选阳性菌。６９－－ａ将初步