利用talens技术创制水稻广亲和新材料

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3、位，，．；＂＿福議师潜杰叢＿皆林，革而游解．；＞＾，学位授予日期三胃ｙ：进巧年化塔心胃＃授．若吟．！ｉ！歌笨寒廷馨葬．人嫁苗綺號．；部：在槪ｒ托；诚募婷＼迦中文摘要中文摘要水稻广亲和资源及基因的应用是克服釉賴杂种不育、实现拙叛间强大杂种优势利用的有效途径－。本论文利用转录激活子样效应因子核酸酶ｔｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎａｃｔｉｖａｔｏｒ（ｐｌｉｋｅｅｆｅｃｔｏｒｓｎｕｃｌｅａｓｅｓＴＡＬＥＮｓ，）技术开展了水稻广亲和基因＜５５、及水猜香味基因化化４公好２的祀向修饰研究，建立了包括靴位点设计、ＴＡＬＥＮ载体构建、水稻遗传转化、分化、祀

4、位点序列检测等过程的水稻ＴＡＬＥＮｓ技术流程；成功突变了台賴９号（賴稻）中Ｗ基因和０地４公／口基因及明恢８６（釉稻）中的Ｓ５基因，其阳性转基因植株中郎基因的突变频率分别达到８４．６％、３１．６％和８６．７％。通过二次遗传转化，成功获得了台賴９号背景下的广亲和基因Ｗ，香味基因Ｏｓ化４公好２及穗粒数相关基因ｏｓｒＨ基因突变体。初步的表型分析发现香味基因化公乂Ｄ成突变显著提島了台搜９号植株的香味。另外，本研究发现外源ＴＡＬＥＮ蛋白可能主要在抗性愈伤组织阶段活跃，抗性？愈伤组织的不断继代能够促进外源ＴＡＬＥＮ蛋白对祀位点序列的多次编辑；而禪序列在再生成植株

5、后的营养生长阶段、生殖发育阶段及后代中保持稳定。由此，我们初步建立了基于抗性愈伤组织不断继代和分化提高ＴＡＬＥＮ转基因植株突变频率和类型的方法。这些研究不仅有利于目标基因产生多种类型突变体，而且有利于促进ＴＡＬＥＮｓ技术在水稻遗传改良上的应用。关键字：水稻广亲和基因香味基因ＴＡＬＥＮｓ技术突变体ＩＡｂｓｔｒａｃｔＡｂｓｔｒａｃｔＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｉｃｅｗｉｄｅｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ巧ｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｇｅ打ｅｓｉｓａｎｅｆｅｃｔｉｖｅｗａｙｏｆｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇｈｙｂｒｉｄｓｔｅｒｉｌｉｔｙａｎｄ

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7、ｏｆＴＡＬＥＮｓｔｅｃｈｎｏｌｏｗｈｉｃｈｉｎｃｌｕｄｅｓｔａｒｅｔｓｉｔｅｄｅｓｉｎＴＡＬＥＮｖｅｃｔｏｒｙｇｙ，ｇｇ，ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｃｍｄｉｆｅｒｅ打ｔｉａｔｉｏ打ａｎｄｓｅｕｅｎｃｅａｎａｌｓｉｓｏｆｔａｒｅｔｅｎｅ，ｇ，ｑｙｇｇ，ｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｎｒｉｃｅ．ＴｈｅＳ４ｇｅｎｅａｎｄ０友公＊／４公／／２ｇｅｎｅｏｆＴａｉｉｎＮｏ