几种不同食性鱼同工酶及草鱼lpl基因的分子研究

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1、分类号：密级：UDC：编号：硕士学位论文几种不同食性鱼同工酶及草鱼LPL基因的分子研究于红亮（1219004）指导教师姓名：吴垠教授专业名称：生理学论文答辩日期：2015年6月2日学位授予日期：2015年7月MasteralDissertationMolecularstudiesoftwokindsofisozymeindifferentfeedinghabitsfishesandthestudyonLPLgeneofgrasscarpYuHongliangSupervisor:Prof.WuYinCollegeofMarineFisheriesan

2、dLife,DalianOceanUniversityJune2015摘要摘要鱼类和所有其他生物一样，生存生长过程中需要营养物质提供生命活动所需的能量。鱼类在进化过程中，分化出不同的食性，鱼类按照食性可分为肉食性、植食性、杂食性类型，在水生生态系统中各自发挥着不同的功能。本文研究不同食性鱼酯酶（EST）及α-淀粉酶（α-AMY）同工酶的表达差异及相互关系和几种不同食性鱼LPL基因序列差异，从分子角度研究鱼类能量传输途径的差异，对认识水生态系统中鱼类不同食性的形成及功能作用具有重要意义。本研究分为两个部分，第一部分为同工酶研究，采用不连续聚丙烯酰胺垂直

3、凝胶电泳法分析不同食性鱼的酯酶（EST）和α-淀粉酶（α-AMY）同工酶特性；第二部分为基因研究，应用基因克隆技术，对草鱼LPL基因部分序列进行克隆与分析，了解不同食性鱼的LPL基因差异。同工酶研究，采用不连续聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳法，对广东鲂（Megalobramaterminalis）、䱗（Hemiculterleucisculus）、鲮（CirrhinaCuvier）、草鱼（Ctenopharyngodon-idellus）、青鱼（Mylopharyngodonpiceus）、鳜（Siniperca-chuatsi），6种不同食性鱼的肝脏、肌

4、肉、心脏、眼、鳃、肾组织进行研究，分析酯酶（EST）及α-淀粉酶（α-AMY）同工酶，得到同工酶电泳图谱。根据谱带迁移率的不同，获得19种EST同工酶，分别为EST1~EST19；α-AMY同工酶共检测到5种，分别为α-AMY1~α-AMY5。结果表明：这六种不同食性鱼6种组织中均存在EST和α-AMY同工酶的分布，他们具有明显的组织特异性；在这些鱼中EST同工酶的种类和表达程度较α-AMY同工酶都占优势；肝脏和肾脏中EST和α-AMY同工酶的活性高于其他组织；EST和α-AMY同工酶，在不同食性鱼中表现出明显的差异，通过对EST和α-AMY同工酶的

5、特性分析，可了解并研究鱼类当前的食性状态，进一步掌握鱼类栖息环境的营养源与生态状况。基因研究，针对草鱼LPL基因序列进行克隆分析。应用PCR技术，获得长度为1058bp的LPL基因部分序列，对其进行分析，结果表明得到1058bp序列，包括外显子I部分68bp，外显子2部分169bp，和内含子I全长821bp。外显子部分与NCBI数据库中查询得到的草鱼脂蛋白酯酶（LPL）基因mRNA序列（FJ716100.1）相应的外显子部分相似度为99.58%。测得的草鱼脂蛋白酯酶（LPL）基因外显子部分序列与NCBI数据库中查询的5种鱼类的脂蛋白酯酶（LPL）基因

6、序列的相应部分进行相似性比对，结果显示，草鱼和鲢、团头鲂、翘嘴鲌、鲤、鲫相似度分别为：98.3%、95.8%、95.8%、84.4%、83.5%；草鱼和鲢；翘嘴鲌和团头鲂；鲤和鲫分别聚在一起，然后再聚为一支。关键词：同工酶；电泳；食性；脂蛋白酯酶；克隆IAbstractAbstractLikeanyotherspecies,fishalsoneedlotsofnutrientsthatprovideenergyfortheirlifeactivities,suchasgrowthanddevelopment.Intheprocessofevoluti

7、on,fishdifferentiatedintomanykindsoffeedingfishes(carnivorous,phytophagous,filterfeeders,omnivorous),whichallplayanimportantroleinaqueoussystem.Molecularstudiesontheshapingoffish’sfoodfeedingandthedifferencesofenergychannel,whichisbebefitforunderstandingthefounctionoffish.Thiss

8、tudywasdividedintotwoparts,thefirstpartisanalysisofEST