六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响

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1、分类号:学校代码:密级公开学号:湖南中医药大学硕士学位论文六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响学科专业中医骨伤科学研究方向骨伤科疾病的中医药防治研究生:王乐导师姓名及职称:肖四旺教授学位类型:专业学位中国湖南长沙二零一五年五月原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文是本人在导师指导下,独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中特别加以标注引用的内容外,本论文中不包含任何他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得湖南中医药大学或其他单位学位、证书而使用过的材料。与我共同对本研究所做过重要贡献的单位及个人均已在论文中作了明确说明并致谢。关于学位论文使用授权说明本人完全了解湖南中

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3、间盘退变(胶原蛋白(与推间盘退变动物模型的选择中医对惟间盘退变的认识与研究推间盘退变的病因病机中医治疗推间盘退变的进展六味地黄丸与推间盘退变本研究存在的问题与展望参考文献隨附录:攻读学位期间主要研究成果及发表论文附录文献综述附录剂量换算附录相关实验实物图摘要目的:通过观察六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响,探讨六味地黄丸防治椎间盘退变的疗效。方法:将只月龄清洁级新西兰兔随机分为六味地黄丸组(组)、模型组组)、假手术组(组)、空白对照组(组),每组只。模型组、六味地黄丸组予建立椎间盘退变动物模型,全麻后消毒铺巾,经左腹前外侧入路依次切开皮肤、腹外斜肌、腹内斜肌、腹横肌,沿腰大

4、肌肌间隙推开后腹膜和大血管,暴露和椎间隙,用的微量注射器随机选择椎间盘注射入注射后标记好实验动物的椎体并予生理盐水冲洗,依层次缝合,放回笼中。假手术组行相同手术入路进入腰椎,再依次缝合组织。切口予络合碘涂擦消毒。术后给予青霉素万单位肌注防感染,每天次,连续使用天。将六味地黄丸胶囊溶于生理盐水后,六味地黄丸组给予六味地黄胶囊溶液灌胃,每天次;模型组、假手术组、空白对照组灌予等量生理盐每天次,自然喂养。于最后一次灌胃后小时分周、周、周、周分批次处死动物,留取椎间盘标本。酶联免疫法测定椎间盘终板糖胺多糖总量、硫酸软骨素和硫酸角质素,比值,放射免疫法测定透明质酸含量。检测蛋白多糖、型胶原、型胶原旳含量

5、,检测蛋白多糖、型胶原、型胶原的表达。结果:假手术组新西兰兔与模型组相比较,模型组兔蛋白多糖的表达及含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、型胶原的表达及含量均明显低于假手术组,亦低于空白对照组,型胶原含量及表达明显高于假手术组,亦高于空白对照组,其差异有统计学意义,说明兔椎间盘模型成功建立。模型组新西兰兔与六味地黄丸组相比较,模型组兔蛋白多糖的表达及含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、型胶原的表达及含量均明显低于六味地黄丸组,型胶原含量及表达明显高于六味地黄丸组,其差异有统计学意义。说明经六味地黄丸混悬液灌胃后,有一定的治疗效果。六味地黄丸

6、组内,手术后周与周、周与周、周与周相比较,蛋白多糖的表达及含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、型胶原的表达及含量逐渐降低,但与模型组比较,趋势较小;型胶原的表达及含量逐渐升高,但与模型组比较,趋势较小,,差异有统计学意义,表明六味地黄丸能有效延缓椎间盘的退变;模型组内,周与周、周与周、周与周相比较,蛋白多糖的表达及含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、型胶原的表达及含量下降,型胶原的表达及含量升高,,差异有统计学意义,也说明椎间盘退变模型成功建立。结论:六味地黄丸能上调椎间盘退变模型中糖胺多糖含量、硫酸软骨素硫酸角质素比值、透明质酸含量,适

7、度下调椎间盘退变模型中型胶原的表达,上调型胶原的表达,稳定了蛋白多糖含量,在一定程度上延缓了椎间盘的退变。关键词:六味地黄丸;椎间盘退变;细胞外基质;蛋白多糖;糖胺多糖;硫酸软骨素;硫酸角质素;透明质酸;型胶原;型胶原AbstractObjective::,,,,,,,,,,HA)content.Rt-PCRdetectionproteoglycanandcollagentypeI,,:,,,,,

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