免疫层析法快速定量检测饲料及食品中黄曲霄毒素b_1的研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：415614913007南昌大学硕士研究生学位论文免疫层析法快速定量检测饲料及食品中黄曲霉毒素队的研究QuantitativeImmunochromatographicAssaysforDetectionofAflatoxininFeedandFood王树颖培养单k(院、系）：食品学院食品科学与技术国家重点实验室指导教师姓名、职称：赖卫华博士、教授陈媛学士、工程师申请学位的学科门类：工学硕士学科专业名称：食品工程论文答辩日期：2015年5月25日答辩委员会主席:评阅人:2015年5月、学位论文独创性声明本人

2、声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：王签字日期：2〇/>年6月斗日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权

3、南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：玉树躲导师签名（手写）签字曰期：2WJr年6月斗日___________签字曰期：％/j年6月夺曰论文题目姓名i+m学号论文级别博士□硕士V院/系/所1品专业Mm联系电话

4、E_mail通信地址(邮编)：备注："V公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，_______年__月后公开)摘要摘要黄曲霉毒素(AFs)由二呋喃环和氧杂萘邻酮组成，是一种强致癌性物质。黄曲霉毒素B1（AFB1）是AFs的衍生物中毒性最强的，AFB1的摄入是导致肝癌的主要因素之一。饲料和粮食作物若水分含量高，存放温度不适宜，极易被AFB1污染，且AFB1能够耐高温，在后续的加工过程中很难被破坏，这就给人类和动物的安全带来很大的威胁。本文建立了胶体金免疫层析和荧光微球免疫层析两种方法来定量检测饲料及食物中的AFB1，用这两种方法对饲

5、料和食品样本进行了加标回收实验，为后续的项目的产业化提供了数据支撑。本文首先建立了定量检测AFB1的胶体金免疫层析方法。胶体金免疫层析技术定量检测与定性检测有所不同，相比于定性分析中追求T线完全消线，定量检测则需要保证线性范围内T、C线颜色均不消失，且控制T/C值随着浓度的变化成线性变化。在一系列的优化试验后，结果表明：标记时的pH为6.0、T线全抗原的浓度为1.5mg/mL、胶体金标记抗体的浓度为4μg/mL、金标抗体的用量为1.2μL是胶体金免疫层析试纸条制备的最优条件，试纸条稳定时间是20min。在最优条件的基础上，研究对试纸条

6、的灵敏度、可重复性、稳定性以及保存时间做了评估。结果显示，本方法的灵敏度为5.7ng/L，与肉眼定性检测试纸条2μg/L的灵敏度相比有较大的提高。由于该方法较高的灵敏度，在检测实际样本时，可以通过高稀释倍数结合溶剂萃取法对样本进行前处理，既可以减弱基质效应的影响，又可以避免复杂的前处理步骤。对于酱油等液态样本，可以直接稀释一定倍数后检测。稳定性试验证明该方法有较好的批内稳定性，对于批间稳定性，可以采用每次检测单独建立标准曲线的方法解决。加速老化结果显示，在常温下保存14d后试纸条趋于稳定，保存期大于一年。最后，研究将研制的胶体金免疫层

7、析方法用于饲料和食物样本的定量检测，得到了一系列不同基质的加标回收效率，并总结了相应规律，为后期项目产业化提供了一定的数据支持。荧光微球（FM）具有稳定性好、激发光下可产生肉眼可见的荧光以及价格便宜等优点，在层析反应中得到了广泛的应用。本文选择荧光微球作为标记材料，基于EDC介导的方法，将FM和抗AFB1单克隆抗体偶联形成复合物，建I摘要立了荧光微球免疫层析技术结合荧光微球读取仪定量检测系统，用于检测酱油样本中的AFB1。研究的一系列优化实验表明：T线抗原的浓度为1.5mg/mL，C线驴抗鼠二抗的浓度为0.1mg/mL，标记抗体的荧光

8、微球的用量为5μL是制备荧光微球免疫层析试纸条的最优条件。在最优条件的基础上，本研究建立了荧光微球免疫层析法，检测灵敏度为8.4ng/L。由于该方法的灵敏度较高，对于酱油样本的检测可以采用直接稀释的前处理方法。对4种酱油