基于胶体金免疫层析技术制备快速检测中药中黄曲霉毒素b_1试纸条的研究

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1、学位论文基于胶体金免疫层析技术制备快速检测中费中黄曲霉毒素氏试纸条的研巧Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｂａｓｅｄ〇凸ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｉｍｍｉｍｅｃｈｒｏｍａｔ：ｏｇｒａｐｂｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｒａｉｄｄｅｔ：ｅｃ村ｏｎｏｆａｆｌａ化ｘｉｎＢｓｔｒｉｉｎｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐｉｐＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｒｅｓｅａｒｃｈ、杨英：王建教授杨美华研究员指导教师姓名申请学位级别；硕±专业名称；中药学２０１５年４月论文答辩时间：２０１５年５月论文提交时间：二０—五年五月中文摘要一目的：基于胶体金免

2、疫层析技术制备种快速检测莲子、当归、姜粉、陈皮、西洋参、白巧中黄曲霉毒素Ｂｉ（ＡＦＢｉ）的试纸条，Ｗ期建立简单、快速、经济、高效的黄曲霉毒素的检测方法。方法：①采用酶联免疫吸附法（ＥＬＬＩＳＡ）对制备抗ＡＦＢｉ单克隆抗体效价；②采用梓樣酸兰钢还原法制备纳米金颗粒，制备的胶体金溶液经目测法评估、透射电镜扫描法、紫外分光光度计法观察金颖粒分散均匀程度及测定平均粒径大小（Ｉｎｄｉｒｅｃｔｃｏｍｅｔｉｔｉｖｅｃｏｌｌｏｉｄａｌｏｌｄ；③采用间接竞争胶体金免疫层析技术ｐｇｉｍｍｕｎｅｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈｔｅｃｈｎｏｌｏ，ＩＣＧＴ），优化纳米金标记抗体最

3、佳偶联浓度、ｇｐｙｇｙ－ＢＳＡ金标抗体最佳偶联Ｈ和包被在硝酸纤维素膜（ＮＣ）上ＡＦＢ（检测线）和ｐｉ二抗羊抗鼠ＩｇＧ（控制线）浓度；④采用滴加标品溶液法，确定免疫层析试纸条的最低检测限，考察试纸条的性能（特异性；⑤采、稳定性及重现性）用试纸条检测法对市售莲子、当归、姜粉、陈皮、西洋参、白巧样品中ＡＦＢ初筛，并采ｉ用ＵＦＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法分别对市售６种中药样品中ＡＦＢ。ｉ的含量进行测定：结果：①试纸条制备的研究结果显示当制备ＡＦＢ单克隆抗体浓度为ｉ４３ｍ／ｍ，ＩＸＩＳＡ）ｌ：ｌ．〇ｘｌ〇，ｉＣ．８ｇＬ酶联免疫吸附法（Ｅ抗体效价评估为时ｓｏ为化Ｏｌｎ

4、ｇ／ｍＬ的时候，抗体效价良好；胶体金溶液在５２８ｎｍ处有最大吸收波长，金６ｉ／ｉｎＬＨ．２颗粒的平均粒径约为４０ｎｍ，８；胶体金标记抗体最佳标记浓度为在｜ｇｐ－Ａ，Ｂ，下，抗体与胶体金偶联结果最佳ＮＣ膜上最佳吸附抗原浓度（ＡＦＢＳｉ检）３ｍ／．二Ｇ）．５ｍ巧ｍＬ，控制线最佳吸附浓度为０／ｍＬ；！！线为化ｇ抗羊抗鼠（Ｉｇｇｌ制备的试纸条最低检测限为２．５ｎｇ／ｍＬ，检测时间Ｏｍｉｎ，对试纸条特异性的考察结果显示，其性能良好。②试纸条对６种中药中ＡＦＢｉ初筛结果显示：６份莲子、９份当巧、２３份姜粉９ｔ且２．５ｎ／ｍＬ，１０、１份白巧、份陈皮药材样品中，检

5、测出ＡＦＢ含量超过ｉｇ份西洋参样品中未检测出阳性样品。Ｉ成都中医药大学２０１２级硕±学位论文ＬＣ－ＭＳＭＳ６／，ＡＦＢ⑤定量分析结果显示：份莲子样品呈阳性的含量分布ｉ－ＡＦＢ．范围在：４．３７７８２／ｋｇ；９份当归样品呈阳性，的含量分布范围在：帖ｉ＂－－３．８５１０．８２／ｋ２３份姜粉样品呈生，ＡＦＢ的含量分布范围在２．５３６．８２／ｋ惦：帖；ｇ；阳１，ｇ１份白巧样品呈阳性，ＡＦＢ，的含量分布范围在：２．７５帖／ｋｇ；９份陈皮样品呈阳性，ＡＦＢ－的含量分布范围在：ａ／：２．９０ｍ．２１ｋ；西洋参样品中未检测出阳性样品或低ｉ）ｇｇ于定量限Ｃ－试

6、纸条的检测结果与ＬＣＭＳ／ＭＳ结果相比较，提示制备的试纸条灵敏度、稳定性良好，能够满足部分中药中黄曲霉毒素Ｂ初步筛查的目的。ｉ结论：本研究所制备的快速检测中药中ＡＦＢｉ的试纸条具有经济合理、操作简便、结果直观、灵敏度高的优点。与常规的ＡＦＢｉ分析方法相比，试纸条检测省略了繁琐的操作步骤和晶贵的仪器设备。能满足中药材的实时、实地快速检测目的。同时，为建立中药材中ＡＦＢ了参考和依据。ｉ的快速筛查方法提供，但是，由于中药化学成分复杂基质干扰严重，制备的免疫层析试纸条仅适用于组分与ＡＦＢ。，优化示踪物标记免疫蛋ｉ结构差异性较大中药快速检测因此白。，提高试纸

7、条检测特异性、灵敏度也是今后值得研巧的重点－ＭＳ／ＭＳ关键词：黄曲霉毒素Ｂ试纸条快速检测；中药化ＵＰＬＣｉ；；ＩＩ成都中医药大学２０１２级硕±学位论文ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｄｅｖｅｌｏｌ：ｈｅｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄ１：ｅｓｔＳｔｒｉｂａｓｅｄ０打也ｅｌａｔｅｒａｌ日ＯＷｊｐｐｔｔＢｉｍｍｕｎｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｌ：ｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｒａｉ过过ｅｅｃｉｏ打ｏｆａｆｌａｔｏ