量子点免疫层析快速定量检测HCG

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1、生物化学与生物物理进展ProgressinBiochemistryandBiophysics2014,41(5):497~507www.pibb.ac.cn量子点免疫层析快速定量检测HCG*杨秋花1)**王鑫2)**杨久敏3)李雪1)宋涛1)宫晓群1)张兵波4)***常津1)***(1)天津大学材料学院纳米生物技术研究所，天津300072；2)天津医科大学总医院，天津300052；3)天津医科大学基础医学院，天津300070；4)同济大学先进材料与纳米生物医学研究院，上海200092)摘要近年来，量子点以其

2、独特的光学性质被广泛应用到医学检测上．血清中人绒毛膜促性腺激素(HCG)的含量是诊断早期妊娠的常用指标，也可用于异常妊娠性疾病的早期发现和鉴别诊断．本文采用超声乳化法制备了高质量的亲水性量子点，并将其与免疫层析试纸条技术相结合，在此基础上自主研发了用于试纸条检测的量子点免疫荧光检测仪，对血清中HCG的含量进行了高灵敏度的快速定量检测．结果表明，对于血清中的HCG含量检测，最优检测条件为加样体积50滋l，反应时间15min，检测的灵敏度达到0.85U/L，高于商品化的胶体金试纸条．这种检测技术简单、快速、灵敏

3、，有望在其他蛋白质类标志物的检测中得到广泛应用．关键词量子点，免疫层析，现场检测，人绒毛膜促性腺激素(HCG)学科分类号K826.13，K826.2，R44DOI:10.3724/SP.J.1206.2013.00181[23]近年来，随着科学技术的不断发展，在生物医缺陷．自1990年Beggs等利用胶体金免疫层析学检测领域涌现出了大量新颖的检测技术和检测设技术检测人绒毛膜促性腺激素(HCG)以来，胶体金[1-9]备．其中，基于免疫反应的检测技术更是引起也发展成为免疫层析技术中最常用到的标记物．但了人们的广

4、泛关注，这是因为免疫反应涉及抗体和是，这种检测方法只能进行定性或半定量检测，极[24-30]抗原间高度互补的立体化学、静电力、氢键、范德大地限制了它的应用范围．鉴于此，人们发展华力和疏水力的综合作用，因而可以达到很高的选了一系列标记物如乳胶颗粒、磁性纳米粒子、上转择性和灵敏度，这是其他任何单独一种理化分析技换发光以及有机荧光染料等，以达到可以对待测物[31-40]术难以达到的．目前，免疫检测技术已经广泛应用进行定量检测的目的．由于依靠光学系统来检到众多相关的领域，如医学检测、环境监测、食品测具有灵敏度高、检

5、测速度快、有望实现高通量检质量检测以及出入境检验检疫等方面．自1959年测等优点，因此采用荧光标记的免疫层析技术得到Yalow和Berson首次将放射性同位素与免疫反应了广泛关注．但是传统的有机荧光染料荧光强度不[10]相结合发展出放射性免疫检测技术以来，一系列高，且容易发生光漂白，影响了检测的灵敏度以及的免疫检测技术纷纷涌现并不断发展，如酶联免疫稳定性．与传统的有机荧光染料相比，量子点具有[11-14][15-18]吸附法、荧光免疫检测技术以及化学发光很多优点，比如吸收光谱宽、发射光谱窄且呈高斯[19-2

6、2]检测技术等．尽管这些检测技术优点很多，如特异性好、灵敏度高并且可以进行定量检测等，但*国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2012AA022603).操作都比较复杂，费时费力，这些缺点在很大程度**共同第一作者.上限制了它们的使用范围．在20世纪80年代初，***通讯联系人.人们发展了一种新型的快速检测技术，即免疫层析常津.Tel:022-27401821,E-mail:jinchang@tju.edu.cn技术．这种检测技术过程简单、迅速，不需要专门张兵波.Tel:021-65983706-81

7、9,E-mail:bingbozhang@tongji.edu.cn收稿日期：2013-04-25，接受日期：2013-08-19人员进行操作，很好地弥补了上述几种检测技术的··498生物化学与生物物理进展Prog.Biochem.Biophys.2014;41(5)[41-44]对称、发射波长可以调节，荧光强度高且稳定等.10min，关闭加热，继续搅拌冷却至室温．制备好Zhang等[45]将量子点与免疫层析技术结合起来，并的CdSe核量子点用丙酮洗涤，于8000r/min离心研发了配套的定量检测分析仪，可

8、以对检测结果进分离30min，沉淀物溶于10ml三氯甲烷中．包壳行定量检测，但是检测过程中的各种参数并没有系时，将分散在三氯甲烷中的核量子点加入到25ml统研究，且定量检测时只选择检测线的荧光强度．三口烧瓶中，向其中加入1.5g十八胺和5g十由于实际检测中病人的血清样品差别很大，对量子八烯，通入氩气30min后，加热至100℃保持5～点的荧光强度产生很大影响，因此采用检测线的荧10min保证体系中的三氯甲烷完全挥