ra及il-24对胎鼠肺泡ⅱ型上皮细胞增殖及转分化的影响

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1、分类号：民７２２单位代码：１０４４０密级：公开学号：２０１２２２０２０？游透掌巧巧女＃化伶戈ＲＡ及比－２４对胎鼠肺泡ＩＩ型上皮细胞増殖及转分化的影响Ｅｆｆｅｃ－ｔｏｆＲＡａｎｄ比２４ｏｎ化ｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＰｒｉｍａｒｙＦｅｔａｌＡｌｖｅｏｌａｒＥｐｉ化ｅｌｉａｌＴｙｐｅＩＩＣｅｌｌｓ研究生ｒ局瑞伟指导教师：刘秀香副教授协助指导教师；王超云副教授专业名称；临床医学（化科学））所在院（系：临床医学院

2、—二一—五年Ｈ月十日入学日期：二０年九月日论文完成日期：二０原创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得滨州医学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本声明的法律责任由本人承担。一＾研究生签名时间：乃。年月日；為峰泽Ｕ关于论文版权使用授权的说明本人完全了解滨州医学院有关保留、使用学位论文的

3、规定，艮Ｐ：学校有权保留送交论文的复印件和电子材料，允许论文被查阅和借阅；本人授权滨州医学院可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名為并争导师签名间：Ｗ年＾月細２滨州医学院硕壬学位论文ＲＡ及ＩＬ－２４对胎顧肺泡ＩＩ型上皮细胞増殖及转分化的影响摘要目的：探讨分离、纯化、培养原代胎鼠肺泡ＩＩ型上皮细胞（ｆＡＥＣＩＩｓ）的方法；ＷＲＡ－）与介素２４（比２４）ｆＡＥＣＩＩｓ增殖及转分化的影响及维甲酸（对

4、。方法；剖腹取孕１９天胎鼠肺组织，运用膀酶、ＶＩ型胶原酶联合消化、差速离必、差速贴壁、ＩｇＧ免疫粘附的方法分离、纯化得到ｆＡＥＣＩＩｓ。细胞培养２化、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ，倒置显微镜下观察细胞生长状况；血球细胞计数板计数细胞数目，描绘生长曲线；透射电镜观察细胞超微结构；免疫巧光、激光共聚焦显微镜观察肺表面活－）－ＰＣ民性蛋白（ＳＰＣ）、水通道蛋白５（ＡＱＰ５的表达实时巧光定量ＰＣＲ（民Ｔ）；Ｐ－ＣｍＲＮＡ检测Ｓ、的表达。利用透射电镜及激光共聚焦免疫巧光法２４ｈ－－对细胞进行鉴定。鉴定好的细胞培养后，分别ＷＲＡ、忙２４及正２４中和

5、抗－体（ＡｎｔｉＩＬ２４）作为干预方式，干预作用２４、４８、７化后，嗟哩藍（ＭＴＴ）法检测细胞增殖情况和活力，倒置显微镜观察细胞生长状况，流式细胞术检测细胞周期和细胞调亡－ＰＣＲ检－，民Ｔ测班ＣｍＲＮＡ、的表达，Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ检－５测ＳＰＣ、ＡＱＰ蛋白的表达。结果：１、分离得到的胎鼠肺泡ＩＩ型上皮细胞纯度为９７．８±２．１％。细胞生长状况：细胞呈岛状分布生长，随着时间，细胞数目增多，体积增大，逐渐出现双核细胞及桥状连接，７２ｈ细，最终细胞出现空泡化走向调ｔ。细胞数目：随时间细胞数增多在，（．Ｏ）胞数最多之后细胞数减少，

6、各时间点差异有统计学意义ＰＯｌ。细胞超微结构：２化、４化细胞有ＡＥＣＩＩ特征性的微绒毛和板层小体；７２ｈ细胞处于ＡＥＣＩＩ和肺泡Ｉ型上皮细胞（ＡＥＣＩ）之间的转分化中间状态细胞，细胞表面有微绒毛或细胞质内有板层小体－；９化微绒毛和板层小体消失。免疫巧光：细胞质中ＳＰＣ绿色巧光在４化表达最强，随后逐渐减弱，细胞膜上点状分布的ＡＱＰ５红色巧光随时＾７２ｈ可见两者共表达。ＳＰ－－间逐渐增强，ＣｍＲＮＡ、＾０パｍＲＮＡ的表达；说ＣｍＲＮＡ在４化表达最强，随后逐渐减弱；ｍＲＮＡ的表达量随时间逐渐增强。２、ＲＡ对ｆＡＥＣｎｉｓ的作化细胞增殖和活为

7、：ＲＡ作用２４ｈ对细胞增殖和活为无影响（巧＞０．０５）；而作用４化后，ＲＡ明显促进细胞增殖、增强细胞活力（戶＜０．０１），＜．。细胞生长状况，ＲＡ且促进作用在作用７２ｈ最显著（戶００５）：与对照组相比使，。得细胞状态更佳，细胞贴壁更紧，折光性强在作用７２ｈ效果最明显细胞周期：ＲＡ作用２４ｈ对细胞周期无影响（Ｐ＞０，７化，ＲＡ．０５）而作用４抓、后使细胞更多＜＞的处于Ｇ２期和Ｓ期（ｆ０．０１）。ＲＡ作（Ｐ细胞调亡：用２４ｈ对细胞调亡无影响０．０５），＜０而ＲＡ作用４化、７化后．０１）。，早期调亡与晚期掘亡细胞比例均显著低于对照组（戶

8、胖－ＣｍＲＮＡＲＡ－表达