nek2与前列腺癌侵袭性和预后的相关研究

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1、？分类号密级ＵＤＣ编号博ｉ学位论文－ＶＮＥＫ２与前列腺癌侵袭性和预后的相关研究■—？－ｒｅ－ＯｖｅｒｅｘｐｓｓｉｏｎｏｆＮＩＭＡｒｅｌａ化ｄｋｉｎａｓｅ２ｉｓａｓｓｏｃｉａ化ｄｗｉｔｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｏｏｒｒｏｎｏｓｉｓｏｆｒｏｓｔａ化ｃａｎｃｅｒｐｇｐ曾彥茹导师姓名钟惟德教授专业名称外科学培养类型专业型论文提交日期２０１５年３月２０日南方医科大学２０１２级博壬学位论文ＮＥＫ２与前列腺癌侵袭性和预后的相关硏

2、究ｒｅｓ－ＯｖｅｒｅｘｐｓｉｏｎｏｆＮＩＭＡｒｅｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅ２ｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｏｏｒｒｏｎｏｓｉｓｏｆｒｏｓｔａｋｃａｎｃｅｒｐｐｐｇｐ学位申请人曾彦茹导师姓名钟惟德教授专业名称外科学培养类型专业型培养层次博壬研究生所在学院第一临床学院２０１５年３月１５日广州博去学位论文ＮＥＫ２与前列腺癌侵袭性和预后的相关研究博±研究生：曾彦茹指导教师：摘要研究背景和目的：中也体是人类细胞的微管组织中

3、也，在有丝分裂纺键体的形成和染色体分离起到关键作用。有研究显示各种各样组织来源的癌细胞通常表现出与中也体数目或结构相关的多极纺鍾体一。而些位于中屯体的细胞周期调节蛋白激酶，是有丝分裂进程和形成正确双极纺锥体所必需的。目前公认的中也体相关激酶是Ｎ郎２，它有两种剪接变体Ｎ邸２Ａ和Ｎ邸２Ｂ。它们的表达调控细胞周期。ＷＫ２是活性的丝氨酸和苏氨酸激酶，磯酸化多种参与中也体复制巧细胞周。期调控蛋白质其结合微管，在中也体含量丰富，有助于中也体在细胞周期的Ｇ２／Ｍ期分裂。异常Ｎ郎２活动因未能调节中也体复制，从而导致非整倍体，这些

4、都是肿瘤发生的影响因素。目前已经证实包括乳腺癌、肺癌、睾丸癌和弥漫性大Ｂ细胞淋己瘤等人类肿瘤中ＮＥＫ２表达水平增高。ＮＥＫ２在非转化的乳腺上皮细胞中过表达会导致中也体过度复制。内源性ＮＥＫ２表达增加导致乳腺癌细胞的中也体扩増并表达致癌的Ｋ－ｒａｓ。从目前的研究来看，ＮＥＫ２在癌细胞中经常存在表达的明显升高。虽然在肿瘤细胞中观察到了Ｎ郎２的增量调节和基因不稳定性，但是Ｎ郎２的上调在前列。Ｎ郎２腺癌作用仍不明确在这项研究中，我们调查了人类前列腺癌组织莊片的表达模式和抑制Ｎ邸２的表达对前列腺癌细胞增殖功能的改变。

5、结果显示ＮＥＫ２的表达与前列腺癌患者的预后密切相关。总之，ＮＥＫ２过度表达可预测前列腺癌复发。Ｉ材辑和方法：患者及组织：该研究得到广州医科大学广州市第一人民医院的伦理委员会批准。所有的患者都签署知情同意。。所有标本均按照道德和法律标准进行匿名处理免疫组化分析使用组织芯片购自上海（Ｓｈａｎｇｈａｉ化ｔｄｏＢｉｏｔｅｃｈＣｏ，ＬＴＤ－－０９９８（ＣａｔＮｏ：ＨＰｒｏＡｄｅ化ＯＰＧ１），该芯片包含例前列腺原位癌组织及１例前列腺癌旁组织，附带患者相应的临床信息，且所有患者术前均没有接受过化疗及放

6、疗。Ｔａｙｌｏｒ数据库包含１４９例接受前列腺癌根治术病人的前列腺癌组织和２９例癌旁良性组织的ｍＲＮＡｓ表达水平，对应患者总体生存时间和术后１至１７日个月５１。（平均个月）的后续检查等详细临床资料前列腺癌根治术的日期被视一亡为生存分析的第天。ＰＳＡ复发被认为是无生化复发终点。除了意外原因，死被认为是总生存期的终点。细胞培养，转染和处理细胞增殖实验是把２Ｘ１０３个细胞接种到９６孔板，培养２４小时，４８小时和？ＣＣＫ８溶ＣａｔＮｏ：ｉ７２小时后每孔：Ｃ０日３８Ｂｅｏｔｉｍｅ饥ｎａ２０ｕｌ３７Ｃ继加液（，ｙ），，续赠

7、育４小时，终止培养。每孔选择４９５ｎｍ波长，在酶联免疫监测仪上测定各±。ＲＮＡ，ｓｉＲＮＡ？１光吸收值，结果用均数标准差表示的干扰按照说明书的方法用２４８转染细胞，然后培养培养小时，４小时和巧小时再行检测分析。ＲＴ－ＰＣＲＱＴＲＩｚｏｌ法从ＲＮＡ。使用前列腺癌细跑和组织中提取，然后逆转录所有数据．ｗａｒｅｒ３－ｔｉｃｏｎＭｏｎｉｔｏｒｓｏｆｔ（ｖｅ．１Ｒａｄ。甩Ｏｐ，Ｂｉｏ）分析Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ—转染４８小时后提取蛋白。取４０咕蛋白质样品进行ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶电泳后将凝胶上的蛋白转移

8、至膜上．标记预染的位置。日％脱脂牛奶封闭，并加入ＮＥＫ２５－５７３２ＲＢ－－ｉｏｓｓＣｏＬｔｄ．Ｃｈｉｎａ过〇１；１１抗５（：４７７７８ＳａｎｔａＣｒｕｚ抗体化，，）