klf4的泛素化调节在乳腺癌发生发展中的作用研究

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1、＾京碱和皆学條中刮等據博ｉ研究生学位论文北京协巧医学院研究生院学校代巧：１００２３学号：Ｂ２０１１００３００１博±学位论文ＫＬＦ４的泛素化调节在說滕癌发生发展中的作用研究ＫＬＦ４ＵｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎａｎｄＩｔｓＲｏｌｅｉｎＴｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ所院：肿瘤医院姓名：周红红指导教师：刘芝华教授导师小组；林晨教授詹启敏教授学科专业；细胞生物学研究方向；师瘤分子生物学完成日期；２０１５年４月北京协和医学院中国医学科学院博止研究生学位论文ｍ目录摘要１英文摘要３前

2、ｅ５材料与方法２４结Ｓ４９论７２７８参考文献７９Ｓ金獅９９文献综述１００致谢１２９个人简历１３０独创性声明和学位论文版权使用授权书１３１Ｉ北京协和医学院中国医学科学院博尘研究生学位论文巧索引表索引表１部分Ｅ３连接酶在肿瘤中的功能１４表２ＦＢＸ０３２ｓｉＲＮＡ序列２６表３实验中所使用的克隆、突变及检测ＰＣＲ引物２６表４实验中所使用的试剂盒２９表５实验中使用的抗体Ｗ及与抗体交联的亲和纯化凝胶２９表６实验中使用的主要试剂３０－表７ＳＤＳＰＡＧＥ

3、蛋白电泳分离胶的配制３５表８实验中使用到的主要仪器设备３８表９慢病毒包装的质粒转染体系４２表１０ＲＮＡ逆转录反应体系４５表１１巧光实时定量ＰＣＲ反应体系４５表１２巧光实时定量ＰＣＲ循环条件参数４５表１３ＰＣＲ产物片段双酶切反应体系４６表１４ＤＮＡ片段与载体的连接体系４６巧北京协和医学院中国医学科学院博±硏究生学位论文圍索引图索引图１本实验中所使用的部分载体质粒图谱２５图２ＫＬＦ４在乳腺癌细胞系中的蛋白表达情况５０图３ＫＬＦ４在细胞内通过蛋白酶体途径降解，半衰期极短５１ｓ２图

4、４ｉＲＮＡ敲降实验条件的优化５５ＲＮＡ文库的５５图Ｅ３泛素连接酶相关的ｓｉ筛选图６五个候选Ｅ３连接酶对ＫＬＦ４蛋白半衰期的影响５７图７ＦＢＸ０３２与ＫＬＦ４的相互作用５８图８ＦＢＸ０３２介导防ＬＦ４的泛素化并促进ＫＬＦ４通过蛋白酶体途径降解．．．．．．．５９图９ＦＢＸ０３２对ＫＬＦ４不同缺失突变体稳定性的影响６１图１０ＦＢＸ０３２与ＫＬＦ４不同缺失突变体的相互作用６２图１１ＦＢＸ０３２对ＫＬＦ４綾基端缺失突变体泛素化的影响的图１２ＦＢＸ０３２缺失突变体与ＫＬＦ４的相互作用６４－图１３Ｆｂｏｘ结构域是ＦＢ

5、Ｘ０３２促进ＫＬＦ４降解的关键结构域６４图１４ＦＢＸ０３２在乳腺癌细胞系中的相对表达６６１ＦＢＸ０图５ＫＬＦ４和３２在细胞内的共定位６６图１６ＳｉＲＮＡ敲降ＦＢＸ０３２对ＫＬＦ４蛋白表达水平的影响６７图１７稳定过表达ＦＢＸ０３２对ＫＬＦ４蛋白表达水平的影响６７图１８稳定过表达ＦＢＸ０３２对细胞增殖的影响６８图１９瞬时敲降ＦＢＸ０３２对细胞迁移能力的影响的图２０氨化可的松和ｐ３８抑制剂可Ｗ提高ＫＬＦ４的稳定性７０图２１ＦＢＸ０３２介导的ＫＸＦ４降解需要活性ｐ３８的存在７０ＩＩＩ北京协和医学院中国医学科学

6、院博±研巧生学位论文中巧文缩略词中英文缩略词英文缩写英文全称ＫＬＦ４ＫｒＵ－１化ｅｐｐｅｌｆａｃｔｏｒ斗ｏｓ－Ｈ巨ＣＴＨｏｍｏｌ：〇ｔＥ６ＡＰｃａｅｎｕｓｇｏｕ１ｈｅｒｂｏｘｙｌｔｒｍｉＲＩＮＧ氏ｅａｌｌｙｉ打ｔｅｒｅｓｔｉ打ｎｅｗｅｎｅｇｇＣＲＬＣｕ－ａｓｅｃｏｍｅｘｌｌｉｎＲＩＮＧｌｉｇｐｌ－－－ＳＣＦＳｋｐｌＣｕｌｌＦｂｏｘｃｏｍｐｌｅｘＳＫＰ－－ｌＳｈａｓｅｋｉｎａｓｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｒｏｔｅｉｎ１ｐｐＡＰＣＡｎａｐｈａｓｅｐｒｏｍｏｔｉｏｎｃｏｍｐｌｅｘＦＢ

7、ＸＯＦ－ｂｏｘｏｎｌｙＦＢＸＷＦ－ｂｏｘ－ａｎｄＷＤｒｅｐｅａｔ－ｂｏｘ－ＦＢＸＬＦａｎｄｌｅｕｃｉｎｅｒｉｃｈＭＯＳｍａ－ＳＵｌｌｕｂｉｑｕｉｔｉｎｒｅｌａｔｅｄｍｏｄｉ行ｅｒｓｉＲＮＡＳｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＮＡＲｓｈＲＮＡＳｈｏｒｔｈａｉｒｉｎＲＮＡｐ，，３－－ｕｎＵＴＲ３ｔｒａｎｓｌａｔｅｄｒｅｇｉｏｎｓＵＰＳＵｂ－ｍｉｑｕｔｉｎｒｏｔｅａｓｏｅｓｓｔｅｍｉｐｙＣＨＸＣｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅＰＡＧＥＰｏｌｙａｃｒｙｌａｉｎｉｄｅｅｌｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｓｉｓ