hbv感染免疫耐受期产妇脐带血pdcs tlr9、irf7、ifn-α变化及补肾解毒对其表达的影响

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1、分类号：学校代码：密级公开学号：湖南中医药大学博士学位论文感染免疫耐受期产妇脐带血、、变化及补肾解毒对其表达的影响学科专业：中医内科学研究方向：中西医结合防治肝病作者姓名：彭建平导师姓名、职称：孙克伟教授学位类型：科学学位中国湖南长沙二零一五年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他已经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得湖南中医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：关于学位论文使用授权说明本人了

2、解湖南中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名导师签名HBV感染免疫耐受期产妇脐带血、、变化及补肾解毒法对其表达的影响中文摘要第一部分：的体外培养方法的建立目的：建立衆细胞样树突状细胞（的体外培养方法。方法：釆集健康产妇脐带血，分离脐带血单个核细胞，用含重组人样酪氨酸激酶配体（、白细胞介素（，的完全培养基连续培养，每隔天半量换液。第天加入的后收集细胞行流式检测，同时检测培养上清水平检测。在培

3、养过程中，用倒置相差显微镜观察培养孔中的形态特征变化。结果：脐带血单个核细胞培养后可见圆形扁平细胞布满视野，后细胞开始贴壁细胞质伸展开，看起来体积有所增大，圆形，透亮，并可见散在的小集落形成。培养第天，细胞体积较前继续增大，多数为圆形，部分细胞表面可见小的突起，并可见少量梭形、蝌蚪状、星形或其他不规则形的细胞，培养液中集落较前明显增多、增大。培养第天，集落数量及集落内细胞数逐渐减少，而培养液中圆形或具有小突起的悬浮细胞逐渐增多。流式细胞仪检测发现、、均表达阳性的细胞，该细胞为。在培养过程中，比例不断增加，其中在培养开始时仅占脐带血单个核细胞总数的，第天升至，第天时达到高峰，为

4、。培养第天，培养上清进行水平达±。第二部分：对健康产妇脐带血、、的表达影响目的：观察对体外培养的健康产妇脐带血、、的表达影响。方法：体外培养细胞，培养第天收集各孔培养上清，超离心病毒颗粒，留病毒溶液，荧光探针法检测浓度。将培养第天的与不同载量的(1x105copies/mL、和空白对照共培养。共培养后，每组均加入终浓度为的继续培养。检测中、的表达，检测、蛋白表达，法测培养上清水平。结果：荧光探针法检测获得的浓度为，满足实验要求。对、的表达呈浓度依赖性，载量越高，对、表达的抑制效果越强。当终浓度为时，、表达水平最低。对、蛋白的表达亦呈浓度依赖性，载量越高，对、蛋白表达的抑制效果

5、越强。当终浓度为时，、蛋白表达水平最低。对培养上清液的表达影响亦呈浓度依赖性，载量越高，对培养上清液的表达的抑制效果越强。当终浓度为时，培养上清液的表达水平最低。第三部分感染免疫耐受期产妇脐带血、、变化及补肾解毒法对其表达的影响目的：比较感染免疫耐受期产妇脐带血及健康产妇脐带血、、变化及补肾解毒法对免疫耐受期产妇脐带血、、表达的影响。方法：选择湖南中医药大学第一附属医院感染免疫耐受期产妇例及健康对照例，体外培养脐带血。同时制备补肾方（六味地黄丸）、解毒方（甘露消毒丹）、补肾解毒方（六味地黄丸合甘露消毒丹）含药血浆。将培养的第天的分为空白组、补肾药物血浆组、解毒药物血浆组、补肾

6、解毒药物血浆组、空白血浆组组进行干预，培养后检测、的表达，技术检测、蛋白表达，法检测培养上清水平。结果：感染免疫耐受期产妇脐带血、的表达较正常产妇明显下降。产妇外周血水平与、表达的水平呈负相关。补肾与补肾解毒含药血浆均能一定程度上提高感染免疫耐受期、的表达，尤以补肾解毒组对、的表达影响最大，而解毒药物血浆不能提高感染免疫耐受期、的表达。感染免疫耐受姻产妇、！蛋白的表达较正常产妇明显下降，且产妇外周血水平与、蛋白表达的水平呈负相关。补肾与补肾解毒组药物血浆均能一定程度上提高感染免疫耐受期、蛋白的表达，尤以补肾解毒组对、蛋白的表达影响最大。解毒组药物血浆虽能在一定程度上提高感染免

7、疫耐受期、蛋白的表达，但与空白血浆相比，差异无显著性。感染免疫耐受期产妇培养上清的表达较正常产妇明显下降，产妇外周血水平与培养上清水平行呈负相关。补肾与补肾解毒药物血浆均能一定程度上提高感染免疫耐受期培养上清的表达，尤以补肾解毒组对培养上清表达的影响最大，而解毒组药物血浆不能提高培养上清表达水平。结论：以人为培养初始细胞，利用联合体外诱导，可成功体外诱导出。体外干预后，正常、及蛋白表达下降，从而导致其下游的分泌减少。感染免疫耐受期产妇脐带血、的表达水平及分泌的能力较正常产妇明显下降。感染免疫耐受期患者体