bccip在塞来昔布提高肠癌细胞放射敏感性中的作用机制及临床研究

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1、ＳＯＯＣＨＯＷＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＩ博：ｔ学位论文论文题目ＢＣＣＩＰ在塞来昔布提高肠癌细胞放射敏感性中的作臟制及临麵究研究生姓名徐晓婷指导教师姓Ｓ涂或专业名称放臟学硏究方向医用电离福嫌护论文提交園２０１５年９月ＩBCCIP在塞来昔布提高肠癌细胞放射敏感性中的作用机制及临床研究中文摘要IBCCIP在塞来昔布提高肠癌细胞放射敏感性中的作用机制及临床研究中文摘要IBCCIP在塞来昔布提高肠癌细胞放射敏感性中的作用机制及临床研究中文摘要BCCIP在塞来昔布提高肠癌细胞放射敏感

2、性中的作用机制及临床研究中文摘要第一部分塞来昔布对COX-2不同表达水平肿瘤细胞的放射增敏作用目的：观察和分析COX-2选择性抑制剂塞来昔布对COX-2不同表达水平肿瘤细胞的增殖抑制和放射增敏作用，以及对不同肿瘤细胞作用不同时间后BCCIP基因表达的情况。方法：选择人肺腺癌细胞A549、宫颈癌细胞HeLa及结肠癌细胞HCT116进行实验研究。采用CCK-8法测定不同浓度塞来昔布与肿瘤细胞培养不同时间后，对细胞活性的影响；克隆形成实验观察塞来昔布对三种肿瘤细胞放射敏感性的影响；Westernblot法观察COX-2基因的蛋白表达；所有实验数据均

3、以means+SD表示，两组间比较采用配对样本t检验。细胞存活曲线用拟和软件GraphPad软件生成，以线形二次方程及多靶单击模型拟合，反映细胞敏感性的参数D0、Dq、N和K值由软件直接得出。结果：肺腺癌细胞A549和宫颈癌细胞HeLa都有COX-2的高表达，而结肠癌细胞HCT116的COX-2表达是阴性的；不同浓度和不同作用时间的塞来昔布对三种肿瘤细胞株均具有明显的增殖抑制作用，增殖抑制率（IR）随药物浓度增加及作用时间延长而呈增高趋势，具有剂量和时间依赖性；在0～40μmol/L范围内，塞来昔布对细胞增殖抑制作用无统计学差异，后续实验都采

4、用对细胞增殖无明显影响的塞来昔布浓度进行实验；30μmol/L塞来昔布对三种细胞均有放射增敏效应，SERD0值分别为：A549细胞1.254，Hela细胞1.213，HCT116细胞1.224；三种肿瘤细胞株中均有BCCIP的正常表达，但表达水平略有差异，COX-2表达阴性的HCT116细胞在塞来昔布作用一定时间后，可见BCCIP表达上调。结论：肿瘤细胞中COX-2表达水平并不影响塞来昔布对肿瘤细胞的放射增敏效应，30μmol/L塞来昔布处理COX-2表达阴性的HCT116细胞后6小时，细胞的BCCIPI中文摘要BCCIP在塞来昔布提高肠癌细

5、胞放射敏感性中的作用机制及临床研究表达明显升高。关键词：塞来昔布，放射敏感性，BCCIP第二部分shRNA法构建稳定敲低BCCIP基因的结肠癌细胞目的：构建稳定敲低BCCIP基因的结肠癌细胞并观察塞来昔布对BCCIP不同表达水平的结肠癌细胞放射敏感性的影响。方法：采用BCCIP-shRNA质粒转染HCT116细胞建立BCCIP敲低细胞模型C12，通过RT-PCR技术检测了HCT116细胞中瞬转质粒后BCCIP转录本表达水平，通过Westernblot技术比较正常和稳定敲低BCCIP基因的HCT116细胞中BCCIP蛋白表达的情况，通过克隆形成

6、实验观察塞来昔布对同源但BCCIP表达水平不同的HCT116细胞株的放射增敏效应。结果：转染了pPUR/U6-311+pSilencer2.1Hyg-633和pPUR/U6-311+pSilencer2.1Hyg-730载体组合的HCT116细胞中BCCIP的表达在转录本水平有明显降低，降低程度超过95%（P<0.05）。收集稳定转染后经嘌呤霉素筛选的单克隆C12细胞及对照组细胞总蛋白，采用Westernblot法从蛋白表达水平检测BCCIP的表达情况，与未转染组细胞相比，转染pPUR/U6-311+pSilencer2.1Hyg-730的H

7、CT116细胞中BCCIP的表达在蛋白质水平有明显降低。30µmol/L塞来昔布对HCT116细胞有明显的放射增敏效应，增敏比为SERD0=1.224，但在BCCIP低表达的C12细胞中未观察到塞来昔布的放射增敏效应，增敏比SERD0=1.038。结论：BCCIP稳定敲低的HCT116细胞（以下都称为C12细胞）可以被成功构建并长期培养，与BCCIP正常表达的HCT116细胞相比，30µmol/L的塞来昔布对该细胞的放射敏感性没有影响。关键词：BCCIP，放射敏感性，结肠癌第三部分BCCIP基因在塞来昔布放射增敏中的作用机制目的：观察BCCI

8、P基因在塞来昔布提高HCT116细胞放射敏感性中的作用，并探讨和研究可能的机制。方法：采用Westernblot法观察经30μmol/L塞来昔布处理后用6Gy剂量照