2-甲氧基雌二醇对瘢痕疙瘩成纤维细胞放疗凋亡及乏氧诱导因子-1表达影响的研究

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1、案也京械如皆聲像中＠聲５钟每化博ｉ研究生学位论文北京协和医学院研究生院学校代码：１０化３学号：Ｂ２０１３００１０７３博ｄｒ学位论文２－甲氧基雌二醇对癒痕瘡癌成纤维细胞放疗－调ｔ及乏氧诱导因子１表达影响的研究所院：北京协和医院姓名：龙飞指导教师；王晓军教授导师小组；整形外科学组学科专业；整形外科学．研巧方向：癒痕瘡癌治疗完成日期；２０１５年４月目录１中文摘要英文摘要３前７ａ参考文献９政１１１１材料

2、和方法一２７第部分－．２７实验胃的．．．２７实验方法２８实验结果Ｗ３５论结论３６３７参考文献第３９二部分３９实验胃的３９实验賞皮４０实验结果職４５结论４７４８参考文献论於宗述５１参考文献５６附录６０缩略词表６０２论文及会议摘要题录６６３实验论文参考文献巧致谢８５独创性声明及学位论文版权使用授权书８７北京协和医学院博Ｈ：硏巧生学位论文２－甲氧基雌二

3、醇对癒痕疫疮成纤维细胞放疗调ｔ及－乏氧诱导因子１表达影响的研究中文摘要研究背景：一疲痕挖疮是皮肤损伤愈合后形成的种过度增生的异常漉痕组织，表现为癒痕组织过度增生，，并向周围正常组织浸润性生长。因其具有独特的生长特性及临床表现也被人们视为一种创伤愈合后形成的皮肤良性肿瘤。目前仍缺乏较为理想的治疗方法，目。放巧作为防止療痕疫瘡术后复发的治巧手段前在临床应用较为广泛。但由于療痕疮落自身具有放疗抵抗，对放疗不敏感，术后的复发率仍较高。乏氧被认为－是肿瘤放疗不敏感的重要因素

4、，而乏氧诱导因子１则被认为是乏氧调控的关键因子。我们前期的实验也证实了癒痕疫疼组织中乏氧诱导因子高表达，且在接受放疗一后，其表达会进步升高，。结合肿瘤研究领域的发现我们推测疵痕疫疼组织中乏－氧诱导因子１与细胞放疗的不敏感密切相关－。本实验拟要验证乏氧诱导因子１是否－２ＭＥ２是療痕挖溶成纤维细施放疗抵抗的关键因子；通过乏氧诱导因子１的抑制剂－１抑制乏氧诱导因子的表达，能否提高癒痕疫落成纤维细胞放疗的敏感性。研究目的；－１．验证乏氧诱导因子１在漉痕疫嬉成纤维细胞中的高表达及放

5、疗后的变化。２－１．探讨乏氧诱导因子敲除后的療痕疫溶成纤维细胞的生长情况及其对放疗敏感性的变化。３２ＭＥ２．研究对癒痕挖嬉成纤维细胞放疗调亡的影响。４．初步探讨２ＭＥ２对癒痕疫疼成纤维细胞的作用机制。研究方法：１ｌ．在常氧和乏氧两种状态下培养细胞，通过ＷｅｓｔｅｒｎＢｏｔ检测放疗前后疲痕疫溶成纤维细胞阻Ｆ－ｌａ的表达差异。２－．通过慢病毒载体转染癒痕挖疮成纤维细胞，将ＨＩＦｌａ基因敲除。通过ＣＣＫ试剂－检测细胞的生长情况，流式细胞技术检测ＨＩＦｌａ基因敲除后的癒

6、痕疮瘡成纤维细１北京协和医学院博±研巧生学位论文胞的放射调亡情况。３．２ＭＥ２２４小时后通过用不同浓度的作用療痕层落成纤维细胞，对细胞进行放疗。流式细胞技术检测细胞的放射调亡情况。ＣＣＫ检测细胞的生长情况。４－ＰＣＲ．通过用不同浓度的２ＭＥ２作用療痕疮疮成纤维细胞２４小时后，通过ｑＲＴ检－－ＩＦＬ技Ａ测ＨＩＦｌａ基因表达，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测Ｈｌａ蛋白表达，Ｅ检测血管内皮生长因子的表达。：研巧：结果１－．ｌａ蛋白表达要高于常氧条件在乏氧条件下，癒

7、痕挖瘡成纤维细胞Ｈ圧，且在接一－ｌａ蛋白表达量会进步升高受放疗后，ＨＩＦ。－２．ＨＩＦｌａ基因敲除后的疲痕疫落成纤维细胞对放疗更为敏感，细胞的调亡率较对照组有明显的増加，并集中于晚期调亡，但细胞的生长情况不受影响。３．２ＭＥ２作用后的療痕瘡落成纤维细胞对放疗更为敏感，细施的放射调亡率较对照组有明显的增高，并集中于晚期调ｔ。且随着药物浓度的增加，细胞的放射调亡率不一断升高，呈现定的剂量依赖效应。４－．２ＭＥ２对疲痕运溶成纤维细胞ＨＩＦｌａ基因表达没有明显影响，但却能有

8、效的抑制Ｈ－ａ蛋白－－ＩＦｌ的表泣。同时我们还发现２ＭＥ２对ＨＩＦ１的结构蛋白ＨＩＦｌｐ的表达也没有影响。此外，２ＭＥ２还能抑制ＶＥＧＦ因子的分泌。最后，２ＭＥ２还可Ｗ明显抑制疲痕一运落成纤维细胞的生长，且呈现定的剂量依赖效应。研巧结论：１－．ＨＩＦｌａ基因敲除后的齋痕疮落成纤维细胞对放疗的敏感性明显提高。２ＨＩＦ－ａ蛋白的．２ＭＥ２能够抑制癒痕疫溶成纤维细胞ｌ表达，对其基因的表达无巧显影响。３．２ＭＥ２能够增加寐痕运落成纤维细胞