黑蜂王台病毒中国jl1株的分离鉴定及全基因组序列分析

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1、分类号：S854.4单位代码：10193密级：公开学号：2012619硕士学位论文黑蜂王台病毒中国JL1株的分离鉴定及全基因组序列分析Isolation,identificationandanalysisofthecompletegenomesequenceofBlackqueencellvirusChina-JL1作者姓名：杨倩学位类别：农学硕士专业名称：临床兽医学研究方向：现代兽医临床诊疗指导教师：崔焕忠、宋战昀所在学院：动物科学技术学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。

2、尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业

3、大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要蜜蜂是自然界中最重要的授粉昆虫，近年来蜜蜂疫病频发给养蜂业带来巨大的损失。黑蜂王台病自1

4、955年首次报道以来，目前呈世界性分布，主要感染蜂王幼虫和蛹，引起虫体变暗变黑，甚至导致整个巢房壁变黑，可引发蜜蜂大量死亡。该病为季节性流行，且常呈隐性感染，可通过水平和垂直途径传播，微孢子虫不仅作为媒介生物在该病的传播中起到重要作用，同时微孢子虫感染蜜蜂后会导致隐性感染黑蜂王台病毒的蜜蜂迅速发病致死。黑蜂王台病毒宿主范围广，不仅可以感染多种蜂属，而且还可感染蜘蛛、蜈蚣等节肢动物。该病毒可与其他蜜蜂病毒发生合并感染。收集来自吉林蜂场的蜜蜂蜂蛹病料的RNA作为扩增模板，依据GenBank上公布的黑蜂王台病毒（Blackqueencellvir

5、us，BQCV）的全基因组序列，自行设计了10对引物，运用RT-PCR首次获得中国BQCV毒株的全基因组序列，命名为中国BQCV-JL1株。其全基因组序列由8358个碱基组成，与GenBank上公布的其他6株BQCV毒株的全基因组序列相比，同源性为86%~93%。中国BQCV-JL1株ORF1的位置为546nt~4676nt（4131nt），ORF2位于5750nt~8203nt，两个ORFs之间存在一段长为543nt（4891nt~5433nt）的ORF3。中国BQCV-JL1株第一个基因功能区ORF1'的位置为546nt~5429nt，

6、包含ORF1和ORF3。在ORF2之前存在内部核糖体进入位点（IRES），其末尾3碱基为CCU（5642nt~5644nt），为促进ORF2翻译的起始密码子，中国BQCV-JL1株第二个基因功能区ORF2'的位置为5642nt~8203nt。中国BQCV-JL1株与Hungary10（EF517515）同源性最高（93%），且分析核苷酸序列和氨基酸序列，与SouthKorea（JX149531）株最接近，表明中国BQCV-JL1株与SouthKorea（JX149531）株均有可能来自欧洲。中国BQCV-JL1株与其他6株全基因组序列在OR

7、F位置划分上存在差异，原因是部分位置发生基因突变。本文从蜜蜂病料中分离获得BQCV，建立荧光定量PCR检测方法，使用DNAStar等软件对全基因组序列进行分析，后经过初步建立体外培养体系进行BQCV的增殖。关键词：BQCV，全基因组序列，RT-PCR，进化树分析，RdRpIABSTRACTInnature,honeybeesarethemostimportantpollinators.Inrecentyearstheepidemicdiseaseonbeescausedhugelosses.BlackQueenCellVirus(BQCV)

8、isakindofpathogenanditwasfirstreportedin1955.Itmainlyinfectsbeelarvaeandpupae,makingthebo