黄芩素抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的作用机制

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3、；早接媒，冷＇；‘奇々Ｉ４；；勝，殺、又学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文研中除特别加Ｗ标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均己在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文ｔ学位论文版权作者签名：的使用授权书学校本有学权位保论文作者完全了解迁宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及留并向国家有关部口或机构送交复印件或磁盘，允许论

4、文被查阅和借阅。本文授权迂宁师范大学，可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人一保电密子文档的内容和纸质论文的内容相致。的学位论文在解密后使用本授权书。ｖｆ＾学位论文作者签名：ｉ指导教师签名：為鸣签名日期：年（５月＞日分类号：学校代码：10165密级：学号：201211001084硕士学位论文黄芩素抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的作用机制作者姓名：王海婷学科、专业：微生物学研究方向：微生

5、物生化导师姓名：谢明杰教授2015年05月黄芩素抑制金黄色葡萄球生物膜形成的作用机制摘要金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）是威胁人类的重要病原菌，是临床上常见的致病菌之一，它可黏附于医疗器械表面、人类组织器官表面形成生物膜，导致反复发作、难以彻底治愈的疾病，如慢性呼吸道感染、肺结核、前列腺炎等。目前临床上常用抗生素类药物治疗生物膜引起的感染，但由于耐药菌群的大量出现，迫切需要寻找一种新型高效的药物治疗生物膜引起的感染。本文对黄芩素抑制Staphylococcusaureu

6、s26112生物膜形成的作用机制进行了研究，结果如下：（1）本文采用刚果红平板法及结晶紫半定量法筛选得到一株产膜菌株——Staphylococcusaureus26112（SA26112），并测定了该菌株生物膜的形成过程，实验结果显示，培养3d的SA26112菌株能形成成熟的生物膜；（2）采用TTC法及平板法测定了黄芩素对SA26112菌株生物膜形成的抑制作用，实验结果显示，黄芩素能抑制SA26112菌株生物膜的形成，其MIC和MBC均为0.04mg/ml；（3）本文测定了黄芩素对SA26112

7、菌株成熟生物膜的作用，结果显示，黄芩素能使成熟生物膜变薄，但不能完全杀死膜内的细菌；（4）采用TTC法测定了黄芩素与环丙沙星联用后对SA26112菌株成熟生物膜的作用，实验结果显示，当黄芩素浓度为0.12mg/ml、环丙沙星为16μg/ml时能完全杀死生物膜内的细菌；（5）通过Dot-blot法检测黄芩素对SA26112菌株PIA合成的影响，发现随着黄芩素浓度增加PIA合成量减少，当浓度为1MIC（0.04mg/ml）时可明显抑制PIA合成；（6）通过微量紫外分光光度计测定黄芩素对SA26112

8、菌株eDNA释放量的影响，发现随着黄芩素浓度增加eDNA释放量逐渐降低，当黄芩素浓度达到1MIC（0.04mg/ml）时eDNA的释放量减少了97%（p＜0.01）；（7）通过RT-PCR技术测定黄芩素对SA26112菌株icaA及cidA基因表达量的影响，结果显示随着黄芩素浓度的增加基因的表达量降低，当浓度达到1MIC（0.04mg/ml）时，与对照组相比icaA及cidA基因的表达量均分别减少了62%和41%（p＜0.01）。关键词：生物膜；金黄色葡萄球菌；黄芩素；icaA；cidAII辽宁