桂皮醛抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物膜形成的实验研究.pdf

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1、分类号＆32墨：lUDC量2窆密级坌珏编号—10299S0—814006桂皮醛抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物膜形成的实验研究EXPElUMENTALSTUDYONINHIBITIONEFFECTOFBIoFILMFORMATIONOFMETHICILLIN—RESISTANTSTAPHYLoCoCcUSAUREUS(MRSA)BYCINNAMALDEHYDE指导教师：邵世和教授⋯作者姓名：贾蓓蓓，。申请学位：医学硕士‘专业名称：临床检验诊断学论文提交日期：2011年4月27日论文答辩日期：2

2、011年6月7日学位授予单位和日期：江苏大学(2011年6月)答辩委员会主席：严杰教授评阅人：独创性声明蚴JIIlIlllIlIIJlllIllllllllrrlIIIlfl丫1894765本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为：茯得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明

3、的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：锄霍泖7年占月／徊学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(

4、包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。?本学位论文属于不保密’日。学位论文作者签名：锄棰2,or／年易月／广日江苏大学硕士学位论文摘要目的：分别通过体内和体外实验研究证明桂皮醛(cinnamaldehyde，CA)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin—resistantStaphylococcusaureus，MRSA)形成生物膜的抑制作用；并检测桂皮醛对MRSA生物膜形成关键基因sarA以及体内试验动物血清中炎症因子IL-Ip的影响，为进一步探讨桂皮醛的作用机制奠定基础。方法：1．将实验菌株

5、(包括6株MRSA和1株标准菌株ATCC25923)接种L．B琼脂平板，37"C培养24h，然后行K．B法和微量琼脂稀释法药敏试验，测得抑菌环直径，最低抑菌浓度(minimuminhibitoryconcentration，MIC)和最低杀菌浓度(minimumbactericidalconcentration，MBC)；2．利用96孔板法构建MRSA生物膜，分别加入不同浓度的药物(包括O．5×，1×，2．5×和5xMIC)，作用24h后分别采用MTT法和菌落计数法测定生物膜内细菌数量的变化；3．分别采用

6、扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜对上述桂皮醛对MRSA生物膜的作用加以验证；4．利用PCR方法检测各待测菌株内有无icaA和sarA两种基因；5．不同浓度的桂皮醛作用MRSA生物膜24h后，提取细菌细胞桂皮醛抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物膜形成的实验研究总RNA，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测用药前后sarAmRNA水平的变化；6．在体内，采用皮下羧甲基纤维素钠(CMC)一囊袋法制备MRSA在SD大鼠体内的生物膜模型，并给模型大鼠分别连续腹腔注射桂皮醛(cinnamaldehyd

7、e，CA)30、45、60(mg／(kg．d))4d，同时设生理盐水对照组和生物膜模型组；7．在给药后的第1d、3d、5d采集菌液进行菌落计数，末次给药后24h断头取血，收集病变组织，进行病理切片观察；用RT．PCR检测血中IL-lfimRNA的变化；用酶联免疫法测定血清中IL．1p含量的变化。结果：1．从K．B法药敏试验结果可以看出：抑菌环直径随加药浓度的增大而增大。当加药浓度为4％(v／v)时，各测试菌株的抑菌环直径均>26mm，达到了药敏试验敏感的范围；微量琼脂稀释法测得各待测菌株的MIC和MBC值

8、的范围分别为0．0625％．0．125％(v／v)和0．25％-0．5％(呐)；2．96孔板法成功制备MRSA生物膜；加入不同浓度药物后，MTT法和菌落计数法测得的结果一致，即随加药浓度的增大，生物膜内菌落数量减少；3．扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜下分别观察到桂皮醛对MRSA形成生物膜的破坏作用，且随加药浓度的增大，生物膜结构破坏越大，膜内菌落数越少；II江苏大学硕士学位论文4．PCR结果显示各测试菌株均无icaA基因，而