鳗弧菌mhk3株t6ss的功能性表达及抗菌特性

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1、緩）寸斯叫义々ＯＣＥＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＨＩＮＡ硕：ｔ学位论文ＭＡＳＴＥ艮ＤＩＳ化ＲＴＡＴＩＯＮＩＩ巧弧菌ＭＨＫ３株Ｔ６ＳＳ的功能性表达Ｉ：Ｉ论文巧目及抗巧特性，ＩＦｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴ６ＳＳｏｆＶｉｂｒｉｏ英文ＳＳ：口Ｍ口ｒＭｗＭＨＫ３ａｎｄｉｔｓａｎｔ化ａｃｔｅｒｉａｌｒｏｐｅｒｔｉｅｓ目巧ｐ作者：Ｍ指导教师：莫照兰研究员’学位类别：全曰制专业学位专业名称：生物工程研究方向：基因工程谨＾１又此论女献给我求学

2、生婚中的所有老师岳舒鱼曼弧菌ＭＨＫ３株Ｔ６ＳＳ的功能性表达及抗菌特性学位论文答辩日期：户三、－指导教师签字：导答辩委员会成员签字：／气Ｊ独倒巧明木人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如巧有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字曰期：＞月曰

3、／／年／店舒学位论文版巧使用巧校书、本学位论文作者完全了解学校有关保留使用学位论文的规定，并同意Ｗ下事项－：１、学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。２、学校可Ｗ将学位论文的全部或部分內容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用＇＇影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学中国学＂术期刊（光盘版）电子杂志社用于出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）＾学位论文作者签

4、名：系倚导师签字：乂巧签字曰期兵丰月曰签字曰期＞４？／丰＜＜月曰＾３＿＾１／獎弧菌ＭＨＫ３Ｔ６ＳＳ的功能性表达及抗菌特性摘要輯弧菌（Ｆ油是重要的海水养殖动物病原菌，广泛生存于各种不同的海洋环境中。海洋细菌具有多种适应海洋环境的策略，而輯弧菌适应海一洋生态环境的机制研巧不多。细菌的ＶＩ型分泌系统（Ｔ６ＳＳ）是种新的蛋白分泌系统，在许多海洋细菌的致病性和环境适应性方面发挥重要作用。本文开展了媛弧菌ＭＨＫ３株Ｔ６ＳＳ的表达及其介导的抑菌作用的研巧，旨在深入了解輯弧菌的生态适应机制。主要的研究内容和结果如下：１ＭＨＫＨ．不同培养条件对靖

5、弧菌３Ｔ６ＳＳ表达和分泌功能的影巧。ｅｐ（溶血一素共调蛋白）是依赖Ｔ６ＳＳ分泌的个基质蛋白，有Ｔ６ＳＳ的细菌能够将Ｈｅ分ｐ一泌到细菌外是Ｔ６ＳＳ具有功能的个重要特征，。在实验室适宜培养条件下媛弧ＨＫＴ６ＳＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓ菌Ｍ３的Ｓ具有分泌Ｈｅｐ的功能。本研究利用ｑｔｅｒｎｂｏｌｔ°°°°％方法，分析ＭＨＫ３在各种温度（１０Ｃ、１６Ｃ、２８Ｃ、３７Ｃ）、盐度（０．２、〇〇ｏ０５／］、５／ｏＮａＣ）Ｈ（６、７、、９、１０）．〇、．０／〇、３．０％．０Ｉ和ｐ８条件下表达和分。ｅ－泌Ｈ的特征，ｅ１００培养时均可表达和分泌，在转录水ｐ。结

6、果显示Ｈｐ在３７°平上，ＨｅｐｍＲＮＡ表达呈随温度升商而降化，在１０Ｃ的表达量最高；在蛋白水°°－－１０１２８平上，胞内Ｈｅｐ蛋白量在３７Ｃ变化不大，而胞外Ｈｅｐ蛋白量在０Ｃ。－５％ＮａＣ较高，在巧Ｃ较低。Ｈｅｐ在０．２Ｉ均有表达和分泌，在转录水平上，ＨｅｐｍＲＮＡ表达量在３％ＮａＣｌ条件下最髙，在其它盐度条件下的表达量均较低；－ＮａＣ在蛋白水平上，ＮＣ．胞内和胞外Ｈｅｐ蛋白量在化５５％ｌ均较高在０．２％ａｌＨ－条件下较低。ｅ在Ｈ６１０均有表达，在转录水平上，ＨｅｐｍＲＮＡ表达量在ｐＨｐｐ８，ＨｅＨ，Ｈ１０时最高；

7、在蛋白水平上胞内和胞外的ｐ蛋白量随ｐ提高而减少在ｐ时ＭＨＫ３不分泌Ｈｅ。蛋白稳定性实验结果显示，分泌到胞外的Ｈｅ蛋白８ｈｐｐ内保持稳定而不降解。上述结果表明，在海详环境的物理因子变化较剧烈的条件下，货弧菌依然能够表达和分泌Ｈｅｐ，发挥Ｔ６ＳＳ的分泌功能。２．密度感应系统调节基因／ＵＸ０对ＭＨＫ３Ｔ６ＳＳ表达和分泌的影响。构建了ＭＨＫ３／ｔｘＯ基因的缺失突变株（Ａ／Ｗ０），研巧发现在实验室培养条件下心１？０－ｅｓｔｅｒｎｂ的生长速率变慢。通过ＲＴＰＣＲ和Ｗｌｏｔ比较分析ＭＨＫ３野生株及突变