静脉注射壳聚糖对大鼠肝纤维化的治疗作用

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1、静脉注射壳聚糖对大鼠肝纤维化的治疗作用Thetherapeuticeffectofchitosanonliverfibrosisratsbyintravenousinjection作者姓名：董友杰专业名称：细胞生物学指导教师：费瑞学位类别：理学硕士答辩日期：2015年5月29日中文摘要研究目的针对壳聚糖特有的理化性质以及当前临床上并无治疗肝纤维化的有效药物[1]特点。本文以四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型，探讨壳聚糖对肝纤维化大鼠的治疗作用，为临床治疗肝纤维化提供备选药物。研究方法选用SD雄性大鼠100只随

2、机取出15只做空白对照组，剩余85只为CCl4给药组。采用腹腔注射CCl4和大豆油混合液复制肝纤维化模型。随机选择空白对照组大鼠3只，CCl4组大鼠5只观察大鼠肝组织表面变化，检测血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）的含量以及肝组织内α-SMA总蛋白和COL3mRNA的表达量，检验肝纤维化模型的成功。将余下80只四氯化碳组大鼠随机分5组，分别为模型组、阳性对照组（甘利欣组）、12.5mg/kg壳聚糖（低剂量组）、25mg/kg壳聚糖（中剂量组）、37.5mg/kg壳聚糖（高剂量组）5

3、组。随后将6组统一采用尾静脉注射方式每天一次连续给药28天，在给药7天、14天、21天和28天后分别进行标本采集，检测血清中ALT、AST和ALP的水平，采用HE染色法常规病理切片，观察肝组织改变情况；通过WesternBlot检测肝组织内α-SMA总蛋白含量，利qRT-PCR检测肝组织COL3mRNA的表达量。研究结果壳聚糖连续尾静脉注射7天、14天、21天和28天分别检测大鼠血清中ALT、AST、ALP水平。与模型组比较，其明显降低，并且低剂量壳聚糖组效果最好。从病理切片可以看出，模型组随时间变化大鼠肝组织炎症浸

4、润明显，胶原纤维明显增多，壳聚糖组和甘利欣组随着时间变化逐渐好转，并且低剂量壳聚糖组好转最明显。WesternBlot结果，模型组大鼠肝组织中α-SMA总蛋白含量升高，壳聚糖各组肝组织中α-SMA总蛋白含量均低于模型组，且壳聚糖低剂量组中α-SMA总蛋白含量最低。qRT-PCR结果发现，壳聚糖可下调COL3的mRNA的表达，壳聚糖和甘利欣组大鼠肝组织中COL3mRNA的表达与模型组相较明显降低，且静脉给予壳聚糖的浓度越大，肝组织中COL3mRNA的表达越多。I研究结论静脉注射壳聚糖对大鼠肝纤维化有明显治疗作用，其中1

5、2.5mg/kg的壳聚糖对大鼠肝纤维化的治疗效果最好。静脉注射壳聚糖可通过降低血清中ALT、AST、ALP的浓度，抑制肝组织中α-SMA总蛋白的表达，下调肝组织中COL3的mRNA的表达，缓解肝纤维化进程。关键词：肝纤维化；壳聚糖；尾静脉注射；α-SMA；COL3mRNAIIAbstractPurposeChitosanhastheuniquephysicalandchemicalproperties,howeveratpresent,therehasnoclinicaleffectivemedicineforthe

6、treatmentofliverfibrosis.Incurrentstudy,theformationofliverfibrosisinratsinducedbyCCl4model,toexplorethediagnosisandtreatmentofchitosanonliverfibrosisinrats,whichprovidealternativemedicineforclinicaltreatmentofliverfibrosis.Materialsandmethods15outof100SDmalera

7、tswererandomlyselectedascontrolgroup,andtheremained85SDmaleratswereusedasCCl4treatedgroup.LiverfibrosismodelwasbuiltbyintraperitonealinjectingthemixtureofCCl4soybeanoil.3ratsofcontrolgroupand5ratsofCCl4treatedgroupwererandomlyselectedtodetectedthechangesofliver

8、surface,andthealanineaminotransferase(ALT),aspartateaminotransferase(AST),alkalinephosphatase(ALP)expressioninserum,aswellastheα-SMAandCOL3expressioninlivertissues,whichmeth