金针菇病毒dsrna快速检测和脱毒方法的研究

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2、日期二〇—五年六月■＇？＊：，卸Ｓ＇■＇■＞＾－：ｖ．，Ｖ．．■＂■－．＂■；＇ｉｒ．ｖ．■；Ｊ．一一＇。，＇＇．＊■－－■Ｖ．ｉ’Ｖ川Ｖ？？‘？－．＾：、ｎ邸占ｖ：ＨＴ片：ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｖｉｍｓｄｓＲＮＡｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄ－ｖｉｒｕｓｅｌｉｍｉｎａｔｅｄｍｅｔｈｏｄｓｏｆＦ／ａｗｍ＂巧／／巧。ｖｅｌｕｔｉｐｅｓＢＹＺＨＡＮＧＪｕｎｌｉｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｅｄｂｙＰｒｏｆ．ＴＡＮｉＱＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ

3、Ｓｕｂｍｉｔｅｄｔｏ＊ＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｉｓｉｔｊｇｇｙＩｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆ化ｅＲｅｕｉｒｅｍｅｎｔｓｑＦｏｒＭａｓｔｅｒＤｅｇｒｅｅＣｏｍｌｅｔｅｄｉｎＪｕｎｅ２０１５ｐ，ＣｏｍｍｅｎｃｅｍｅｎｔｉｎＪｕｎｅ２０１５，原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研巧工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在

4、文中明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者（需亲笔）签名：旅後致又０店年月今日学位论文版权使用授权书、本学位论文作者完全了解学校有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留并。向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅本人授权南京农业大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行栓索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。＂＂（请在Ｗ上方框内打Ｖ）学位论文作者（需亲笔）签名：於後王令如

5、／在年月今日＾导师（需亲笔＞签名年月曰；＾ｂｖｒ《之Ｓ；目录目录摘要ＩＡＢＳＴＲＡＣＴＩｌｌ一第章文献综述１１食用菌病毒的研究概括１１１．食用菌病毒形态和种类２１．２食用菌病毒基因组和里白特征２１１（Ｚ／ｗｓ）．２．趟皮侧耳病毒Ｖｅｗｏｖｉｒｕ３２（Ａｉｂｉｏｖｉｒｓ３１．２．双抱磨茹病毒ｇａｒｃｕｓｓｐｒｕｓｕ）＇ｉＬｔｉｉｒｕｓ１．２．３香茹病毒ｅｎｎｕｓｅｄｏｄｅｓＶ）４１．２．４金针茹病毒｛Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａｖｅｌｕｔｉｐｅｓｖｉｒｕｓ

6、）４１．２５．５其他食用菌病毒２病毒的起源、复制及传播途径６２．１病毒的起源和复制６２．２病毒飢专播途径７３病毒检测方法８３．１电镜法８３．２酶联免疫吸附法８３．３ｄｓＲＮＡ技术８＾．４ＲＰＣ艮法３Ｔ９■３．５生物芯片技术９４食用菌脱毒方法的研究１０４１１．菌丝尖端分离法０４．２组１１织分离法４．３原生质体法１１４．４单抱杂交法１１５研究目的和内容１２第二章金针茹菌株病毒检测和鉴定１３１１试验材料３１１３１．供试菌株１２１４．

7、输。１３１．仪器与设备５１２试验义法６２．１巧养基和试剂的配置１６１金针茹病毒ｄｓＲＮＡ快速检测和脱毒方法的研究２丄１培养基１６２丄２试剂１６２．２培养和收集菌丝１６２．３提取病毒ｄｓＲＮＡ、酶处理和纯化１７２．３．１菌丝预处理１７２．３．２病毒ｄｓＲＮＡ提取１７２．３．３ＤＮａｓｅＩ和Ｓ１Ｎｕｃｌｅａｓｅ酶处理１８２．３．４酶处理产物的纯化１８２．４透射电子显微镜观察１９－２．５ＲＴＰＣＲ鉴定、克隆测序和序列比对１９２．５．１设计引物１９

8、－２．５．２ＲＴＰＣＲ鉴定２０２．５．３克隆测序和序