文心兰2种主要病毒的快速检测及其组培脱毒方法.pdf

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1、热带作物学报2014，35(1)：147—151ChineseJournalofTropicalCro文心兰2种主要病毒的快速检测及其组培脱毒方法刘福秀，王安石，韩玉春，林明光海南出入境检验检疫局．海南海口570311摘要利用感染了建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的文心兰叶片，建立同步检测文心兰2种病毒的双重RT—PCR方法，该方法可一次性扩增出2种病毒的DNA条带，最低可检测到相当于1g的带毒叶片。同时采用花梗组织培养脱毒并结合培养基添加病毒A的脱毒方法，对感染2种病毒的文心兰进行外植体脱毒试验，获得文心

2、兰组培苗脱毒方法用建立的双重RT—PCR检测脱毒效果。脱毒率为75．3％。关键词建兰花叶病毒(CymMV)：齿兰环斑病毒(ORSV)；RT—PCR；文心兰；脱毒中图分类号$682．31文献标识码ARapidDetecti0n0f2MainVirusesinOncidiumandtheMethod0fVirusEliminati0nbyPlantTissueCultureLIUFuxiu，WANGAnshi，HANYuchun，LINMingguangHa／nanEntry&ExitInspection

3、andQuarantineBureau,Haikou,Hainan570311，ChinaAbstractAduplexRT—PCRmethodwasdevelopedforrapiddetectionofOncidiuminfected2importantvirus。Cymbidiumrnos~cvirus(CymMV)andOdontolossumringspotvirus(ORSV)，inonestep．Itcoulddetectthevirusaslowas1gleaftissue．Andam

4、ethodofviruseliminationbyplanttissueculturewasdeveloped．Itcombinedwithlateralmudtissuecultureandananti—virusreagent，virusA，andverifiedtheeffectofvirus—freebyduplexRT—PCR．Theresultsshowedthatthevirus-freeratesofthislateralbudculturewere75．3％．KeywordsCvmb

5、idiumlnosaicvirus；0dontolossumringspotvirus；RT—PCR；Oncidium；Viruseliminationdoi10．3969／j．issn．1000—2561．2014．01．025文心兰(Oncidium)又名跳舞兰、舞女兰、金蝶进行了检测．但作者研究所使用的材料未经过病毒兰、瘤瓣兰等，系兰科文心兰属植物的总称，属于检测．整个脱毒过程也没有专门的病毒抑制步骤和热带复茎性着生兰，原产于西印度群岛、墨西哥、污染控制方法．只在检测诱导出的文心兰原球茎时巴西等

6、地[1-3]。以其花姿优美、花色亮丽抢眼，甚均未发现病毒具喜气．在西洋插花或是节庆活动上常被广泛应为增强我国文心兰产业的国际竞争力．本研究用随着市场需求量的增大．文心兰得到大量推广采用不同的脱毒方法．对感染CymMV和ORSV的种植．种苗主要通过组培快繁获得但在生长过程文心兰种苗进行外植体脱毒试验．探索出文心兰脱中易受到多种病毒的危害．严重影响其产量和品毒处理的适宜方法，并获得文心兰完全脱毒苗。质．其中以建兰花叶病毒(Cymbidium?nosaicirus，多重PCR方法可以通过1次试验同时检测2C

7、ymMV)N齿兰环斑病毒fOdontolossttmringspotvirus．种或2种以上的病毒．如Kuroda等『ll】建立了可同时ORSV)发生最为普遍．且这两种病毒通常在文心兰检测黄瓜花叶病毒(CMV)、蚕豆萎蔫病毒(BBWV一2)上复合感染．造成更为严重的危害『4。目前对病和三叶草黄脉病毒(C1YVV)的多重RT—PCR技术：毒病害的防治主要采用茎尖组织培养结合热处理技Ito等[12】建立了可检测柑橘裂皮类病毒(CEVd)等6术『1，8-9]．但有关文心兰脱毒处理却少有报道．虽然种病毒的多重

8、RT—PCR技术．xie等『l3】建立了一步朱根发等㈣早在1997年就有了关于“文心兰脱毒法RT—PCR同时检测4种甘蔗病毒的方法本研快繁技术研究”的报道．并且通过ELISA法对脱究建立了文心兰两种主要病毒的双重RT—PCR检毒后样品中包括CymMV和ORSV在内的4种病毒测方法收稿日期2013—05—09修回日期2013—10—23基金项目海南省科技成果示范推广专项项目(No．CGSF2011002)；国家质检总局科技计划项目(No．2013IK272