金标免疫渗滤法检测类风湿性关节炎自身抗体的研究

《金标免疫渗滤法检测类风湿性关节炎自身抗体的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、乘兩大？參巧±学位论文金标免疫渗滤法检测类风湿性关节炎自身抗体的研究专业名觀生物物巧学研究生妊名；崔庆红导师姓名；张宇３３日３本论文得到国家自然科学基金项目（３１１７０９５９）和国家重大科学研究计划项目（２０１１ＣＢ９〇）及国家支挣计划项目（２０１２ＢＡＩ２３Ｂ０２）的资助。ＤｏｔｉｍｍｕｎｏｏｌｄｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｓｓａＤＩＧＦＡｆｂｒｇｙ（）ｔｈｅｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｏｆｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓＡＴｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉｔｔｅｄ化

2、ＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＦｏｒ化６ＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｏｆＳｃｉｅｎｃｅＢＹＩ－ＣＵｉｎｇｈｏｎＱｇＳｕｅｒｖｉｓｅｄｂｐｙＰｒｏｆ．ＺＨＡＮＧＹｕＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＭａ２０１５ｙ东南大学学位论文巧巧性声明本人声明所呈空的学位论文是我个人在导师指导下进行的研巧工作及取得的研巧成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外－论文中不包含兵他人已经度表或撰写过的硏巧成果｜一也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本

3、研巧所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＂研巧生签名；日期：＞心Ｉ碑叫申东南大学学位论文使用援巧巧明东南大学、、中国科学技术信息研巧所国家图书馆有枚保留本人所送交学位论文的复印件和电子文挡。，可Ｗ采用影印、缩印或其他复制手段保存论文本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的巧密论文外允许论文被查闽和借阅（包括Ｗ电子信息形式刊登），．可Ｗ公布论文的全部内容或中。论文的公布（包括Ｗ电子信息形式刊登）授权东南大、英文摘要等部分内容学研充生院办理。曰期－研巧生签名：耐：蜡＃师签名：為对＾单摘要［巧目］金标免疫

4、渗滤法检测类风湿性关节炎自身抗体的研究胶体金标记技术的建立催生了两种经典的免疫学检测方法，斑点金免疫凌滤（ＤＩＧＦＡ）和胶体金免疫层析技术（ＧＩＣＡ），其中ＤＩＧＦＡ由于具有快速、结果可直接一判读，、可单人份检测、结果稳定等优点逐渐成为开发各类快速诊断试剂的技术基础Ｄ一系列针对临床ＩＧＦＡ。（ＲＡ）是、食品等多个领域的被建立和应用类风湿性关节炎种自身免疫性疾病，晚期关节多发生晴形难Ｗ治愈，早期诊断对疾病的控制尤为重要，大量研巧己经表明在临床症状出现好几年前患者血清中就会出现特异的自身抗体，对这些自身抗体的检测对ＲＡ的早期诊断非常有利。本文拟建立检测ＲＡ两

5、种自身抗体的ＤＩＧＦＡ，旨在简化检测操作、降低检测成本、在样本量少的情况下可快速开展检测，。为此首先通过与欧蒙试剂盒对比及检测临床确－定的血清对待检抗体特异的抗原进行了筛选制备，采用链酪亲和素生物素结合方式将环瓜氯酸化（ＣＣＰ）与载体蛋白进行偶联，优化了新的含１８个氨基酸的环狀序列：确定了较稳定的类风湿因子（ＲＦ）特异抗原的原料来源，同时优化了特异性高的ＨＲＰ标’二记Ｆ（ａｂ２片段作为酶标抗，并比较了兔ＩｇＧ、人ＩｇＧ、Ｆｃ片段几种常用于ＲＦ检测的）抗原性能。接着，本文制备了抗自身抗体的胶体金探针，对各反应参数进行了优化，确定了较？％Ｈ８２８５７ＬＫＣ〇

6、）／ｍＬＡｕ）２２〇止好的偶联ｐ在．．之间（ｎ２３（５，最小偶联蛋白量为帖／－ｒｉ－Ａｕｌ，最适大分子稳定剂是ＢＳＡ（免疫级）和ＰＥＧ２０Ｋ，较优洗絡纯化缓冲液是ＴｓＨＣ（ｐＨ８．２），最后优化了探针冻干的最佳保护剂为甘露醇。最后，将前两章制各的抗原和探针应用于ＤＩＧＦＡ的建立，对影响检测的多个因素？Ｇ最适稀释液是Ｔｒｉｓ－ＨＣ进行了优化，确定了ＲＩｇｌ（ｐＨ８．２），样品下渗速度是１．４３．３Ｌ－／ｓ，ＢＳＡ，ＰＢＳＴ（Ｈ７４，ｌ％Ｔｗｅｅｎ２０），ＰＥＧＨ大分子封巧剂是洗冻条件是ｐ．同时发现ｗ一和Ｔｅｅｎ对斑点思色有定増强作用，用该试剂检测部分临

7、床血清，显示了良好的检测效果。关巧词，，■，］全标免疫湊滤法环瓜氨酸狀［类风湿性关节炎胶体金探针类风湿因子ＩＡｂｓｔｒａｃｔＴｉｔＤｌｅｏｔｉｍｍｕｎｏｏｌｄｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｓａＤＩＧＦＡｒｔｈｅｒａｅｃｏｎｏｆＳ］ｇ貼ｙ（）ｐｉｄｄｅｔｔｉｐｅｃｉｆｉｃ［ｆｏａｕｔｏａｎｔ化０出ｅｓｏｆｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓＤｏｔｉｎｕｎｕｎｏｇｏｌｄｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｓｓ