金属胁迫下中华稻蝗金属硫蛋白分子特性及功能研究

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1、＾山也义聲博±学位论文金属胁迫下中华稻蜡金属硫蛋白分子特性及功能妍究棚雞二習＞：；作者姓名刘耀明夸ｒ指导教师马恩波教授学科专业动物学研究方向动物生化与分子生物学培养单位生命科学学院学习年限２０１０年９月至２０１５年６月＇－：．Ｋ占■；－．ｒ：ｉ二〇五年六月ｌｌｉｌ山西大学２０１５届博±学位论文金属胁迫下中华稻煌金属硫蛋白分子特性及功能研究作者姓名刘耀明指导教师马恩波教授学科专业动物学研究方向动物生化与分子生物学培养单位生命科学学院学习年

2、限２０１０年９月至２０１５年６月（Ｇ巧ｎｔＮｏ３１０１９８０）本论文研究得到国家自然科学基金面上项目．７和国家自然科学基金重大国际合作项目（Ｇ巧ｎｔＮｏ．３１３２０１０３９２１）的资助二〇—五年六月Ｔｈｅｓｉｓ化ｒＤｏｃｔｏｒ、ｄｅｒｅｅＳｈａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔ２０１５ｇ，ｙ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｅｘｏｓｕｒｅｄ化ｍｅｔａｌｉｎ仿幻ｃＡ／ｗｅ灼ｓ／ｓｐ；ｙＯｒｔｈｏｔｅｒａ：Ａ

3、ｃｒｉｄｏｉｄｅａ（ｐ）ＳｔｕｄｅｎｔＮａｍｅＬｉｕＹａｏｍｉｎｇＳｕｅｒｖｉｓｏｒＰｒｏｆ．ＭａＥｎｂｏｐＭａｏｒＺｏｏｌｏｊｇｙＳｅｃｉａｌｔＡｎｉｍａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒａｎｄｐｙｙＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＤｅａｒｔｍｅｎｔＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｐｓｅ－ＲｅａｒｃｈＤｕｒａｔｉｏｎ２０１０．０９２０１５．０６ＴｈｉｓｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｗａｓｓｕｏｒｔｅｄｂＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆｐｐｙＣｈ

4、ｉｎａＧｒａｎｔＮｏ．３１０７１９８０ａｎｄ３１３２０１０３９２１．（）Ｊｕｎｅ２０１５目录中文摘要ＩＡＢＳＴＲＡＣＴＩｌｌ一第章前言１１１１．重金属概述１丄１領２１丄２铜２１丄３巧３１．２金属硫蛋白基因概述３１．２．１金属硫蛋白的特点４１．２．２金属硫蛋白的生理功能５１６．２．３金属硫蛋白在昆虫中的研究现状１．３中华稽幢６１．３．１中华稻幢的生活习性６１．３．２中华稻幢的生活史７１．４領染毒对中华稻蜡的影响及数字基因表达谱（ＤＧＥ）分析７１

5、．５ＲＮＡ干化应用８１．６研究内容及意义８１．６．１研究內容８１．６．２研究意义９１．７本文创新之处及与所发表论文的相关性９第二章中华稻蜡金属硫蛋白基因的分子特性１１２．１实验材料１１２丄１供试昆虫１１２丄２相关试剂和仪器１１２２．２实验方法１２１２．２．１转录组测序的样品制备２２．２．２中华稻幢总ＲＮＡ提取和反转录１２．２．３中华稻幢金属硫蛋白基因的验证１２２．２．４引物设计和基因扩增１２２．２．５化１３转２．２．６中华稻幢金属硫蛋白基因的表达１４

6、２．２．７统计学分析１５２．３实验结果１５２１．３．１中华稻煌金属硫蛋白基因的验证５２．３．２中华稻幢金属硫蛋白基因序列的分析１７－２．３．３采用ＲＴｑＰＣＲ引物及其扩増效率检测１８２．３．４ＭＴ基因在中华稍蜡不同发育阶段的表达模式１９２．３．５ＭＴ基因在中华稻蜡不同組织部位的表达模式１９２．４讨论２０第Ｈ章中华稻蜡金属硫蛋白基因功能研究２４３２４．１实验材料３丄１主要试剂和仪器２４３．２试验方法２５３．２．１引物的设计２５３．２．２体外合成ｄｓＲＮＡ２６３２．３Ｔ基

7、因沉２７．中华稻幢Ｍ默效率的检测３．２．４采用ＲＮＡｉ技术验证金属硫蛋白基因在中华稻幢体内的解毒能力２７３２．２．５制备ＣａＣｂ感受态细胞７３．２．６构建重组质粒进行ＯｃＭＴ异源表达２８３．２．７表达ＯｃＭＴ融合蛋白的大肠杆茜对金属的耐受能力２９３．３实验结果３０３３．１中华稻蜡ＭＴ基因沉默效率３０３３１．３．２中华巧蜡ＭＴ基因沉默效率后不同浓度重金属的耐受能力３３．３．３中华箱擅ＭＴ基因的异源表达１３．３．４ＯｃＭＴ融合蛋白对重金属铜的耐受性３３３．４讨论巧第四章金属急性染毒对中华稻擅Ｍ

8、Ｔ基因及解毒酶的影响３６４３６．１实验