苦参碱、氧化苦参碱联合对肝癌细胞hepg2的体外活性研究及能量代谢影响

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1、硕士学位论文苦参碱、氧化苦参碱联合对肝癌细胞的体外活性研究及能量代谢影响王怡楠哈尔滨商业大学年月学校代码：学号：学位洽丈苦参碱、氧化苦参碱联合对肝癌细胞的体外活性研究及能量代谢影响王怡楠指导教师姓名王淑静教授哈尔滨商业大学申请学位级别硕士学科专业药理学论文提交日期论文答辩日期：授予学位单位哈尔滨商业大学授予学位日期：嬸寫書夫凌UniversityCode：：哈尔滨商业大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：本论文的所有工作，是在导师的指导下，由作者本人独立完成的。有关观点、方法、数据和文献等的引用已在文中指出，并与参考文献相

2、对应。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经公开发表的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本论文文责自负。学位论文作者签名签字曰期年月‘日哈尔滨商业大学硕士学位论文版权使用授权书本论文系作者本人在哈尔滨商业大学攻读硕士学位期间，在导师指导下完成的硕士学位论文。本论文的研究成果归哈尔滨商业大学所有，本论文的研究内容不得以其他单位的名义发表。本人完全了解哈尔滨商业大学关于保留、使用学位论文的规定，同意学校保留、送交本论文的复印件，允许本论文被查阅和借阅；学校可以公布本

3、论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密学位论文作者签名签字日期丨年么月‘曰导师签名：签字日期》年月曰摘要摘要世纪年代人们开始关注苦参碱和氧化苦参碱，其体内和体外抗肿瘤作用有大量文献记载。然而和许多中药有效成分一样，苦参碱和氧化苦参碱仍存在用药剂量大，对正常体细胞有毒副作用，大剂量不利于应用等问题。目前抗肿瘤方剂中苦参碱与氧化苦参碱多同时存在，为研究二者是否具有协同作用，我们采用联合用药的方法，符合中药用药配伍的一般规律的同时，降低苦参碱

4、、氧化苦参碱用药浓度，分别作用于肝癌细胞和血管内皮细胞，以求实现减毒增效作用。并探讨苦参碱、氧化苦参碱对人肝癌细胞、人脐静脉内皮细胞能量代谢的影响，为研究中药对肿瘤细胞能量代谢影响及抑制肿瘤血管生成方面起到一定提示作用。本实验通过体外培养人肝癌细胞、人脐静脉内皮细胞采用法检测药物对肝癌细胞的增殖抑制作用，结果表明，苦参碱、氧化苦参碱对这两种细胞都具有增殖抑制作用。排列组合法将氧化苦参碱、苦参碱根据等比的浓度梯度两两混合作用于肝癌细胞和内皮细胞，再采用法以药物对细胞的抑制率为考察指标，对照组作比较，选出有效且相对药物浓度较低的

5、一组氧化苦参碱、苦参碱联合浓度进行后续联合实验。细胞计数法绘制氧化苦参碱、苦参碱及联合两种药物对细胞生长曲线的改变，联合组的抑制作用强于单独使用氧化苦参碱组或苦参碱组，而且药物对肝癌细胞的作用较内皮细胞明显。采用染色法观察药物对人肝癌细胞、人脐静脉内皮细胞形态学改变，联合组对两种细胞形态学改变较明显，其次氧化苦参碱组，再则苦参碱组，观察发现药物作用的细胞核浆比减小，细胞核高度固缩，染色程度加深，染色质聚集，碎裂。采用透射电镜进一步实验观察，结果显示给药后，胞质有大小不等的空泡，微绒毛数量减少，线粒体、粗面内质网等细胞器减少，

6、细胞发生凋亡。其中联合组对两种均具有一定的增殖抑制和促凋亡作用，但对肝癌细胞作用明显强于内皮细胞组，说明其主要以抑制肿瘤细胞生长为主，对抑制肿瘤血管生长作用较弱。能量代谢的研究方面，采用法测定细胞蛋白浓度，绘制标准曲线，得出标准方程计算蛋白浓度。通过试剂盒检测葡萄糖酵解中的己糖激酶和丙酮酸激酶活力，结果表明，苦参碱、氧化苦参碱及两者联合可降低肝癌细胞中两种关键酶的活力，以联合组效果最为显著。而对内皮细胞中两种酶活力无显著性改变。采用试剂盒检测葡萄糖有氧氧化的酶：琥珀酸脱氢酶活性发现，苦参碱对肝癌细胞内活性改变甚微，而氧化苦参

7、碱组和联合组都使肝癌细胞内琥珀酸脱氢酶活力明显降低；经氧化苦参碱和苦参碱处理的内皮细胞中活性降低不明显，联合后使内皮细胞中琥珀酸脱氢酶活性降低。采用试剂盒检测培养液中细胞代谢物乳酸和细胞总含量，结果表明，实验各组对内皮细胞培养液中乳酸含量无明显影响，氧化苦参碱组、苦参碱组及联合组均使肝癌细胞培养液中乳酸，量降低，且联合组较苦参碱组、氧化苦参碱组乳酸含量降低效果显著。内皮细胞各组含量下降，肝癌细胞中只有联合组朵显著下哈尔滨商业大予硕十肀位论文降趋势。从能量代谢的角度可以说明苦参碱和氧化苦参碱可引起肝癌细胞的糖酵解作用和有氧氧化

8、作用减弱，使得糖酵解产物乳酸和总降低，而联合组较单独组的作用较强。苦参碱和氧化苦参碱可通过改变细胞的能量生成和改变乳酸含量达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。关键词苦参碱；氧化苦参碱；肝癌细胞；己糖激酶；丙酮酸激酶；乳酸；摘要，，，，，，，，，，，，，哈尔滨商业大学硕丨‘宁：位论文目录目录摘要目录