正文描述:《苦参碱对肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、苦参碱对肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞的影响【摘要】目的:研究不同浓度苦参碱对肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)增殖、体外杀瘤活性的影响.方法:将苦参碱分为0.1,0.2,0.4,0.6,0.8g/L5个浓度组,分别加入含有IL2的DMEM培养基,体外诱导扩增TIL,通过MTT法检测TIL增殖、体外杀瘤活性,采用流式细胞术测定T淋巴细胞亚群,研究苦参碱体外对肿瘤免疫功能的影响.结果:苦参碱低浓度组(终浓度分别为0.1,0.2g/L)对TIL作用不明显,高浓度组(终浓度为0.8g/L)能抑制TIL增殖和体外杀瘤活性(P<0.01
2、),中浓度组(终浓度分别为0.4,0.6g/L)能促进TIL增殖和体外杀瘤活性(P<0.01),CD8+数量有所增加,CD4+/CD8+比值有所下降(P<0.01).结论:合理利用苦参碱可增强患者肿瘤免疫能力.【关键词】苦参碱;淋巴细胞,肿瘤浸润;癌,肝细胞 【Abstract】AIM:Toexploretheeffectofdifferentconcentrationsofmatrineonproliferationandactivityoftumorinfiltratinglymphocytes(TIL)of
3、patientsainvitro.METHODS:Differentconcentrationsofmatrine(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8g/L)ediumsupplementedatrineonproliferationandactivityofTILinvitroetry(FCM).RESULTS:Theloatrine(0.1,0.2g/L)hadnoeffectonTIL.Highconcentrationofmatrine(0.8g/L)hadaremarkableinhibitoryeffecto
4、nproliferationandantitumoractivityofTIL(P<0.01).Themiddleconcentrationofmatrine(0.4,0.6g/L)enhancedtheproliferationandantitumoractivityofTILinvitro(P<0.01).ThepercentageofCD8+increasedandtheratioofCD4+/CD8+decreased(P<0.01).CONCLUSION:Thereasonableuseofmatri
5、necouldenhancethepatientsspecificantitumorimmunefunction. 【Keyatrine;TIL;hepatocellularcarcinoma 0引言 苦参碱作为一种传统的中药成份,可抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和分化,调节肿瘤宿主免疫功能,目前已成为抗癌中药研究的一个热点.但有关苦参碱对免疫功能的影响目前存在很多争议[1].且相关研究多以患者外周血单个核细胞、淋巴器官内淋巴细胞、血清淋巴因子为研究对象,未见有关苦参碱对宿主抗肿瘤细胞免疫的主力肿瘤浸润淋巴细胞(tu
6、morinfiltratinglymphocyte,TIL)抗瘤活性及机制的研究报道.为此,我们选择从肝癌患者新鲜肿瘤组织中分离的TIL为研究对象,探讨苦参碱对其抗瘤活性的影响及可能机制. 1对象和方法 1.1对象 肝癌患者13例(男10,女3),平均年龄45.6(37~58)岁.手术切除的瘤体平均直径5.2cm,病理学诊断均为原发性肝细胞肝癌.苦参碱购自西安天琪植物化学有限公司,分子质量248.37,纯度大于98%,临用前用PBS配成工作浓度.IL2,刀豆蛋白A(ConA),DMEM培养液、MTT,Ⅱ型胶原酶(美国S
7、igma公司).胎牛血清(华美生物工程公司),淋巴细胞分离液(上海试剂二厂). 1.2方法 1.2.1肝癌细胞和TIL分离、表型鉴定无菌切取新鲜人肝癌标本,剪碎,1g/LⅡ型胶原酶消化,过滤,制成细胞悬液,用淋巴细胞分离液,不连续密度梯度分离法分离出TIL和肝癌细胞.瑞氏染色鉴定.肝癌细胞常规培养.TIL(5×108个/L)加入含rhIL25U/L的培养液中,试验组加入苦参碱,分低浓度组(终浓度分别为0.1,0.2g/L)中浓度组(终浓度分别为0.4,0.6g/L)高浓度组(终浓度为0.8g/L),空白对照组不加苦参碱,只
8、加等量的培养液,体外扩增2ancoulter公司提供. 1.2.2苦参碱对TIL体外扩增作用根据IL2诱导TIL增殖情况,选用1U/LIL2作为应用浓度,将含IL2的TIL细胞悬液(5×108个/L,100μL/孔)加入96孔平底培养板中,试验组加入苦参
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