树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外抗小鼠肝癌研究

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1、广西医科大学硕士学位论文树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外抗小鼠肝癌研究姓名：张志明申请学位级别：硕士专业：肿瘤学（普外）指导教师：刘剑勇;李挺2003.5.24主要英文缩写～塑星-一墓塞全签主塞全整LAKlympholdneactiwtedkillercell淋巴因子激活杀伤细胞CTLPBScytotoxicTlymphocyte细胞毒性T淋巴细胞phosphaticbalancesolution磷酸盐缓冲液rhlL一2recombinedhumanintefleuldn一2重组人自细胞介素．2GM·CSFgranulocytemarcophage·colony粒．巨噬细胞

2、集落刺激stimulatingfactor生长因子TILtumor-infiltratinglymphocyte肿瘤浸润性淋巴细胞antigen—presentingcell抗原提呈细胞lactatedehydrogenaseclusterofdifferentiationinterleukin-4naturatkillercelldendriticeeli乳酸脱氢酶分化群白细胞介素．4自然杀伤细胞吸光度树突状细胞艘删∞阱瞰∞阢树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外抗小鼠肝癌研究摘要目的探讨从小鼠骨髓中获得树突状细胞(dendriticcells，DC)并在体外进行培养扩增，在D

3、C的培养过程中加入小鼠H22肝癌细胞全细胞性抗原以致敏DC。用致敏的DC体外激活肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor．infiltratinglymphocyte，TIL)。观察致敏DC撒活的TIL体外对小鼠H22肝癌细胞杀伤活性的作用。，方法从小鼠腿骨中获得骨髓细胞，利用特异性的CD4、CDSa、C～D45R单克隆抗体、补体缓冲液和DC的半粘附性，去除粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、单核细胞和巨噬细胞，再联用粒细胞．巨噬细胞集落刺激因子(granulocytemarcophage-colonystimulatingfactor，GM．CSF)和白细胞介素-4(interle

4、utdn-4，IL-4)体外培养，以获得大量高纯度的DC；在DC培养过程中加入小鼠H22肝癌细胞全细胞性抗原以致敏DC，然后用致敏DC激活TIL，进行体外小鼠14．22肝癌细胞杀伤活性实验。体外小鼠H22肝癌细胞杀伤活性实验中A组为实验组，其效应细胞为DC激活的T／L；B组、C组和D组均为对照组，其效应细胞分别为未经DC激活的TIL、DC激活的小鼠脾、淋巴细胞和未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞，以上4组均以小鼠14_22肝癌细胞为靶细胞，进行体外细胞杀伤活性检测。结果(1)可从每只小鼠骨髓细胞中获得(2-3)×106个Dc，其纯度60％以上。(2)从每克肿瘤组织中可获得(3-8)×1

5、05个TIL，平均为6×105个TIL；体外加入rhlL．2进行TIL培养扩增。11天后，TIL扩增倍数从30-90倍不等，平均约为60倍。(3)未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞(D组)表现出很弱的体外杀伤小鼠H22肝癌细胞的作用，杀伤率为[(9．77±1．39)％】；DC激活的小鼠脾淋巴细胞(C组)和未经DC激活的TIL(B组)均表现出较强的体外杀伤小鼠H22肝癌细胞的作用，杀伤率分别为1(49．46±3．7)铡和【(50．95±3．02)嘲，两者比较差异无显著性(P>O．05)，但它们分别与未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞(D组)相比较，差异均有显著性(P

6、L(A组)表现出很强的体外杀伤小鼠H22肝癌细胞的作用，杀伤率为／，【(71．524_3．88)％】，与其他各组分别比较，差异均有显著性(P<0．01)。y结论(1)小鼠骨髓细胞用GM．CSF和IL．4联合诱生培育，可获得大量高纯度的DC，所得细胞形态和功能符合DC特征。(2)可从荷瘤小鼠中获得TIL并能进行有效扩增。(3)用小鼠H22肝癌细胞全细胞性抗原致敏的DC在体外能诱导TIL产生更高效而特异的杀伤小鼠H22肝癌细胞活性。关键词树突状磊胞({隧孥激活：肿瘤浸亲瓶淋巴细胞馁l蟒眇小黜2雩弛；杀黟；免猡、，v一Studyofanti—mousehepatocellularcar

7、cinomaonTILstimulatedbyDCinvitroAbstractObjective：Dendriticcells(Dc)wereobtainedfrommousemarrowandstimulatedwithlysatesmousehepatocellularcarcinomacells(H22)antigeninvitro．Toinvestigatethekillingactivityoftumor‘infiltratingIymphocytes(TIL)sti